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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-219633

Resumo

Este estudo objetivou avaliar o desempenho diagnóstico (especificidade, Sp; sensibilidade, Se; acurácia, Ac; valor preditivo positivo, VPP; valor preditivo negativo, VPN; e coeficiente de concordância kappa de Cohen, k) de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite clínica (MC) e subclínica (MSC). Para tanto, dois experimentos foram realizados: 1) Avaliação de biplaca de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite; 2) Avaliação de triplaca de meios de cultura cromogênicos para identificação rápida de microrganismos causadores de mastite. Em ambos estudos (1 e 2), a identificação de microrganismos com o uso de meios cromogênicos baseou-se na leitura visual da coloração das colônias microbianas após 18 a 24 h de incubação. Para avaliação da Ac, Se, Sp, VPP, VPN e k dos meios cromogênicos a identificação dos microrganismos por espectrometria de massas (MALDI-TOF) foi considerada a metodologia padrão. No experimento 1, foram avaliadas 514 amostras de leite coletadas de vacas com MC e 667 de MSC, as quais foram inoculadas em dois meios de cultura cromogênicos seletivos para bactérias Gram-positivas e outro para Gram-negativas (CHROMagar, França). No experimento 2 foram avaliadas 500 amostras de leite de vacas com MC e 500 de vacas com MSC, as quais foram inoculadas em três meios de cultura cromogênicos, seletivos para Streptococcus, Staphylococcus e bactérias Gram-negativas (CHROMagar, França). No experimento 1, do total de amostras de MC, houve crescimento de microrganismos em pelo menos um dos meios de cultura, sendo 33,5% (175/514) no meio GP e 27,2% (140/514) no GN. O uso de biplacas com os meios de cultura GP/GN apresentou Ac que variou de 93% (Strep. agalactiae/dysgalactiae; Strep. uberis) a 96% (Prototheca spp./levedura). Com relação às amostras de MSC, houve crescimento de microrganismos em pelo menos um dos meios de cultura, sendo 31,8% (212/667) no meio GP e 4,3% (29/667) no GN. No experimento 2, do total de amostras de MC, houve crescimento de microrganismos em 5% (25/500) no meio seletivo para Streptococcus, 21,4% (107/500) no meio seletivo para Staphylococcus e 23% (115/500) para o meio GN. O uso da triplaca em amostras de MC com os meios cromogênicos apresentou Ac que variou de 94% (Strep. agalactiae/dysgalactiae) a 100% (Pseudomonas spp.; Prototheca spp./levedura). Para as amostras de MSC, houve crescimento de microrganismos em 32,6% (163/500) no meio seletivo para Streptococcus, 45% (225/500) no meio seletivo para Staphylococcus e 34,5% (17/500) para o meio GN. O uso da triplaca com os meios de cultura cromogênicos em amostras de MSC, apresentou Ac que variou de 87% (Staphylococcus não-aureus) a 100% (Escherichia coli; Pseudomonas spp.). O uso da dos métodos de biplaca e da triplaca de meios de cultura cromogênicos apresentaram alta acurácia (Ac >85%) para os diagnósticos dos principais microrganismos causadores de mastite, o que indica que podem ser utilizados em sistemas de cultura na fazenda, com base na visualização de coloração de colônias dos principais patógenos causadores de mastite.

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This study aimed to evaluate the diagnostic performance (specificity, Sp; sensitivity; Se; accuracy, Ac; positive predictive value, PPV; negative predictive value, VPN; and Cohen's kappa coefficient of agreement, k) for chromogenic culture media for rapid identification of microorganisms that cause clinical (MC) and subclinical (MSC) mastitis. For this, two experiments were carried out: 1) Evaluation of biplate of chromogenic culture media for rapid identification of mastitis-causing microorganisms; 2) Evaluation of tri-plate of chromogenic culture media for rapid identification of mastitis-causing microorganisms. In both studies (1 and 2), the identification of microorganisms using chromogenic media was based on the visual reading of the color of the microbial colonies after 18 to 24 h of incubation. For evaluation of Ac, Se, Sp, VPP, VPN and k of chromogenic media, the identification of microorganisms by mass spectrometry (MALDI-TOF) was considered the standard methodology. In experiment 1, 514 milk samples collected from cows with MC and 667 from MSC were inoculated in two culture media selective for Gram-positive bacteria and another for Gram-negative (CHROMagar, France). In experiment 2, 500 milk samples from cows with MC and 500 from cows with MSC were inoculated in three chromogenic culture media, selective for Streptococcus, Staphylococcus and Gram-negative bacteria (CHROMagar, France). In experiment 1, of the total of MC samples, there was growth of microorganisms in at least one of the culture medium in 33.5% (175/514) in the GP medium and 27.2% (140/514) in GN. The use of biplates with GP / GN media showed Ac that ranged from 93% (Strep. agalactiae/dysgalactiae; Strep. uberis) to 96% (Prototheca spp./yeast). Regarding the MSC samples, there was growth of microorganisms in at least one of the culture media in 31.8% (212/667) in the GP medium and 4.3% (29/667) in GN. In experiment 2, of the total of MC samples, there was growth of microorganisms in 5% (25/500) in the selective medium for Streptococcus, 21.4% (107/500) in the selective medium for Staphylococcus and 23% (115 / 500) for the GN medium. When used for CM samples tri-plates with chromogenic media showed Ac raging from 94% (Strep. agalactiae/dysgalactiae) to 100% (Pseudomonas spp.; Prototheca spp./ yeast). For the MSC samples, there was growth of microorganisms in 32.6% (163/500) in the selective medium for Streptococcus, 45% (225/500) in the selective medium for Staphylococcus and 34.5% (17/500) for the GN medium. The use of the tri-plate with the chromogenic media in samples of MSC, showed Ab that varied from 87% (Staphylococcus non-aureus) to 100% (Escherichia coli; Pseudomonas spp.). The use of the bi-plate and tri-plate methods of chromogenic culture media showed high accuracy (Ac> 85%) for the diagnosis of the main mastitis causing microorganisms, which indicates that they can be used in farm culture systems, based on the visualization of colony staining of the main pathogens causing mastitis.

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