AVALIAÇÃO IN VITRO DE LÍQUIDOS IÔNICOS COM POTENCIAL ATIVIDADE ANTIVIRAL FRENTE AO VÍRUS CHIKUNGUNYA

RESUMO

As doenças virais são uma das principais causas de morbidade e mortalidade do mundo, principalmente levando em consideração vírus negligenciados e/ou emergentes, capazes de provocar epidemias, ou o surgimento de novos vírus altamente patogênicos, capazes de se disseminar em todo território mundial. O aumento da resistência aos medicamentos e a constante replicação viral têm sido o gatilho para importantes estudos em terapias antivirais, buscando identificar compostos com atividade promissora. Os líquidos iônicos (LIs) têm atraído considerável atenção nos últimos anos devido às suas propriedades químicas e físicas relevantes, que os tornam moléculas mais estáveis e versáteis, expressando em sua estrutura constituintes que podem ser usados para otimizar suas propriedades e interagir com enzimas e receptores. Dessa forma, o presente estudo, avaliou a possível atividade antiviral in vitro, de cinco LIs, aqui denominados JCZ105, JCZ107, JCZ108, C18MImCl e C16PyrCl, frente ao vírus Chikungunya (CHIKV). Os compostos JCZ foram previamente avaliados in silico, indicando uma baixa toxicidade. Inicialmente estabeleceu-se a citotoxicidade, a partir de concentrações seriadas em células da linhagem Vero. A interferência na replicação viral foi avaliada através da redução do número de placas de lise, utilizando concentrações determinadas por meio do ensaio de citotoxicidade. Ensaios adicionais de mecanismos de ação foram realizados para os compostos C18MImCl e C16PyrCl. Os resultados demostram que os compostos JCZ não promovem inibição viral. Já os compostos C18MImCl e C16PyrCl inibiram cerca de 37% a replicação viral nas concentrações de 5 M, além de uma redução significativa do diâmetro da placa de lise formada em cerca de 90%. Quanto aos ensaios de mecanismo de ação, ambos os compostos avaliados apresentaram inibição de cerca de 97% (em 5 M) e 77% (em 2,5 M) no ensaio de adsorção viral. Já no ensaio de tempo de adição, houve um aumento expressivo na replicação viral, a ponto de romper totalmente a monocamada, impossibilitando a quantificação. Adicionalmente, avaliamos a exposição das células VERO aos compostos anteriormente à inoculação viral, sendo estes mantidos também durante o ensaio de placa, a fim de verificar a interferência dos compostos nas membranas celulares e sua possível indução a inibição da replicação viral. Apesar de nenhuma ação antiviral completa ter sido observada, C18MImCl e C16PyrCl apresentaram inibição parcial frente CHIKV e estes dados nos fornecem informações que podem futuramente auxiliar na síntese de novos compostos com alterações estruturais, visando potencializar na atividade antiviral.

ABSTRACT

Viral diseases are one of the main causes of morbidity and mortality in the world, mainly taking into account neglected and/or emerging viruses, capable of causing epidemics, or the emergence of new highly pathogenic viruses, capable of spreading throughout the world. Increased drug resistance and constant viral replication have been the trigger for important studies in antiviral therapies, seeking to identify compounds with promising activity. Ionic liquids (ILs) have attracted considerable attention in recent years due to their satisfactory chemical and physical properties, which make them more stable and versatile molecules, expressing in their structure constituents that can be used to optimize their properties and interact with enzymes and receptors. Thus, the present study evaluated the possible in vitro antiviral activity of five ILs, here called JCZ105, JCZ107, JCZ108, C18MImCl and C16PyrCl, against the Chikungunya virus (CHIKV). The JCZ compounds were previously evaluated in silico, indicating low toxicity. Initially, cytotoxicity was established, based on serial concentrations in cells of the Vero lineage. The interference in viral replication was evaluated by reducing the number of lysis plaques, using concentrations determined by means of the cytotoxicity assay. Additional tests of mechanisms of action were performed for the compounds C18MImCl and C16PyrCl. The results show that the JCZ compounds do not promote viral inhibition. The compounds C18MImCl and C16PyrCl inhibited viral replication by about 37% at concentrations of 5 M, in addition to a significant reduction in the diameter of the lysis plaque formed by about 90%. As for the mechanism tests, both compounds evaluated showed inhibition of about 97% (in 5 M) and 77% (in 2.5 M) in the viral adsorption test. In the Time of addition assay, there was a significant increase in viral replication, to the point of breaking the monolayer completely, making quantification not feasible. Additionally, we evaluated the influence of the presence of the compounds prior to viral inoculation, being maintained also during the plaque assay, in order to verify the interference of the compounds in cell membranes and their possible induction to viral replication inhibition. Although no complete antiviral action has been observed, C18MImCl and C16PyrCl showed partial inhibition against CHIKV and these data provide us information that may help in the synthesis of new compounds with structural changes in the future, aiming at the possible improvement in antiviral activity and its optimization through different experimental approaches.