SUPLEMENTAÇÃO DO MEIO CRIODILUIDOR COM POLISSACARÍDEOS SULFATADOS DE ORGANISMOS AQUÁTICOS NA CONGELAÇÃO DO SÊMEN DE Colossoma macropomum (CHARACIFORMES: SERRASALMIDAE) FORTALEZA-CEARÁ 2021

RESUMO

O tambaqui é uma das espécies de peixes neotropicais de maior interesse para pesquisa brasileira, destacando-se a congelação seminal. Apesar dos benefícios, a aplicação dessa técnica pode causar danos celulares. Nesse sentido, o uso de macromoléculas, como polissacarídeos sulfatados (PS), pode agir protegendo as células. Assim, objetivou-se determinar se a adição de PS de algas marinhas (Caulerpa cupressoides, Solieria filiformis e Acanthophora muscoides) e de pele de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), age de forma benéfica no enriquecimento do meio criodiluidor do sêmen de tambaqui. Para isso, 30 machos previamente induzidos hormonalmente forneceram o sêmen, que foi posteriormente analisado, fracionado em pools e congelado. No experimento 1, os cinco pools (sêmen de 3 animais cada pool, n=15) foram diluídos e congelados em solução contendo água de coco em pó (ACP-104) e dimetilsulfóxido (DMSO) 10% (19; sêmendiluidor) e suplementada com diferentes concentrações (100; 250; 500 e 1000 g/mL) de PS de algas marinhas ou da pele de O. niloticus (glicosaminoglicanas-GAGs). No experimento 2, seis pools (n =18) foram diluídos e congelados em solução contendo ACP-104 e DMSO 10% ou Glicose 5% e DMSO 10% (19; sêmendiluidor), ambas suplementadas com diferentes concentrações (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 e 5,0 mg/mL) de GAGs de O. niloticus. Uma solução não suplementada foi utilizada como controle em ambos os experimentos. Decorridos 45 dias, as amostras foram descongeladas (45 ºC/8 s), e avaliadas quanto à cinética, morfologia e integridade de membrana espermática em ambos os experimentos e quanto a integridade de DNA espermático no experimento 2. No experimento 1, para a velocidade média do trajeto (VAP), foi observada interação entre as concentrações e as fontes de PS. Quanto à morfologia, os melhores resultados foram observados no sêmen suplementado com PS de C. cupressoides e S. filiformis a 100 g/mL. Para integridade de membrana, o sêmen suplementado com PS de O. niloticus apresentou os melhores resultados em comparação aos demais tratamentos (P < 0.05). Já no experimento 2, os parâmetros de linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e integridade do DNA de espermatozoides congelados em Glicose 5% apresentaram resultados melhores do que em ACP-104. Para integridade da membrana, as concentrações de 0 e 1,0 mg/mL foram melhores do que 5 mg/mL, independente do diluente. A motilidade do sêmen em Glicose 5% apresentou resultados inferiores em 5 mg/mL de GAGs. Portanto, é possível preservar o sêmen de tambaqui usando PS da pele da tilápia e da alga S. filiformis. De modo que, GAGs de O. niloticus, em baixas concentrações, são capazes de melhorar a qualidade espermática pós-descongelamento do tambaqui em meio Glicose 5%.

ABSTRACT

Tambaqui is one of the most interesting neotropical fish species for Brazilian research, especially seminal freezing. Despite the benefits, the application of this technique can cause cell damage. In this sense, the use of macromolecules, such as sulfated polysaccharides (PS), can act to protect cells. Thus, the objective was to determine whether the addition of PS from marine algae (Caulerpa cupressoides, Solieria filiformis and Acanthophora muscoides) and from Nile tilapia skin (Oreochromis niloticus) acts in a beneficial way in enriching the cryodilution medium of tambaqui semen. For this, 30 males previously hormonally induced provided the semen, which was later analyzed, fractionated into pools and frozen. In experiment 1, the five pools (semen from 3 animals each pool, n=15) were diluted and frozen in a solution containing powdered coconut water (ACP-104) and 10% dimethylsulfoxide (DMSO) (19; semen extender) and supplemented with different concentrations (100; 250; 500 and 1000 g/mL) of PS from seaweed or from the skin of O. niloticus (glycosaminoglycans-GAGs). In experiment 2, six pools (n =18) were diluted and frozen in a solution containing ACP-104 and DMSO 10% or Glucose 5% and DMSO 10% (19; semendilutor), both supplemented with different concentrations (0 .5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0; 3.5; 4.0; 4.5 and 5.0 mg/ml) of O. niloticus GAGs. An unsupplemented solution was used as a control in both experiments. After 45 days, the samples were thawed (45 ºC/8 s), and evaluated for sperm membrane kinetics, morphology and integrity in both experiments and for sperm DNA integrity in experiment 2. In experiment 1, for velocity path average (VAP), interaction was observed between concentrations and sources of PS. As for morphology, the best results were observed in semen supplemented with PS of C. cupressoides and S. filiformis at 100 g/mL. For membrane integrity, semen supplemented with O. niloticus PS showed the best results compared to the other treatments (P < 0.05). In experiment 2, the linearity (LIN), straightness (STR) and DNA integrity parameters of sperm frozen in 5% Glucose showed better results than in ACP-104. For membrane integrity, concentrations of 0 and 1.0 mg/mL were better than 5 mg/mL, regardless of the diluent. The semen motility in 5% Glucose presented inferior results in 5 mg/mL of GAGs. Therefore, it is possible to preserve tambaqui semen using PS from tilapia skin and S. filiformis algae. Thus, GAGs from O. niloticus, in low concentrations, can improve the sperm quality post-thawing of tambaqui in 5% Glucose medium.