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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220239

Resumo

Este trabalho objetivou contribuir para o conhecimento da biologia reprodutiva de fêmeas de primatas não humanos (PNH). Foi realizada a morfofisiologia ovariana, identificando a localização in situ de componentes celulares envolvidos no processo de apoptose, antiapoptose, proliferação folicular e da expressão do hormônio anti-Mülleriano (AMH). Foram coletados ovários de seis fêmeas de Aotus nancymaae criadas em ambiente de cativeiro, e de seis fêmeas de Sapajus macrocephalus, de vida livre, nas três fases reprodutivas (luteal, folicular e gestacional), pertencentes à comunidade Nova Esperança localizado em Iquitos, na Amazônia peruana. As amostras foram conservadas em formol, e posteriormente em álcool 70%; submetidas ao processamento histológico, e cortes de 5µm de espessura foram corados em Hematoxilina-Eosina. Em seguida foram realizadas as etapas de aplicações da imunohistoquímica para Caspase-3, Bcl-2, PCNA e AMH. Foi utilizado o programa BioEstat 5.0, para análise de variância da quantificação histológica folicular (Kruskal-Wallis) e da quantificação das células imunorreativas para Caspase-3, Bcl-2, PCNA e AMH (KruskalWallis e Dunn). A associação entre as imunorreações apoptóticas, anti-apoptóticos, prolifarativas e hormonais foi determinada pela Análise das Coordenadas Principais (PCoA) do software R. Em A. nancymaae e S. macrocephalus, houve diferença significativa na quantificação entre os folículos primordiais e antrais pequenos, primordiais e antrais grandes, e primários e antrais grandes (Kruskal-Wallis, p<0,05), nas três fases reprodutivas. Os marcadores proteicos e hormonais variaram significativamente entre os tipos celulares para A. nancymaae (p=0.001) e S. macrocephalus (p=0.002). Em ambas as espécies foi observada imunorreação para Caspase-3-ativada no estroma e células foliculares de folículos primários, antrais pequenos, antrais grandes (células da granulosa, oócitos, células tecais), além do corpo lúteo, nas três fases reprodutivas. Foi observada ainda imunorreação para Bcl-2 em células da granulosa e oócitos de folículos pré-antrais e antrais; e imunorreação para PCNA em núcleos e citoplasmas de oócitos de folículos primordiais e primários, nas gônadas de fêmeas no estágio luteal, em folículos primordiais em fêmeas gestantes e em folículos primordiais normais e atrésicos de fêmeas no estágio folicular; e ainda, imunorreação para o AMH nas células da granulosa e oócitos de folículos antrais em maturação. Assim, as técnicas de imunomarcação para as proteínas Caspase-3, Bcl-2, PCNA e AMH, foram imprescindíveis para determinar a análise da dinâmica ovariana, no sentido de propiciarem dados que sugerem avaliar se folículos estão em estado de atresia ou desenvolvimento e a produção hormonal atuando no processo da foliculogênese dessas espécies.

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This work aims to contribute to the knowledge of the reproductive biology of female nonhuman primates (PNH). Therefore, research was carried out on ovarian morphophysiology, identifying the in situ location of cellular components involved in the process of apoptosis, anti-apoptosis and follicular proliferation, in addition to the expression of anti-Müllerian hormone (AMH). For this purpose, ovaries were collected from six females of Aotus nancymaae raised in captivity, and from six females of Sapajus macrocephalus, free-living, in the three reproductive stages (luteal, follicular and pregnant). The animals belonged to the Nova Esperança community located in Iquitos, in the Peruvian Amazon. The samples were preserved in formalin, and later in 70% alcohol; submitted to histological processing, and 5µm-thick sections were stained with Hematoxylin-Eosin. Then, the steps of application of immunohistochemistry for Caspase-3, Bcl-2, PCNA and AMH were carried out. The BioEstat 5.0 program was used for analysis of variance of the follicular histological quantification (Kruskal-Wallis) and the quantification of immunoreactive cells for Caspase-3, Bcl-3, PCNA and AMH (Kruskal-Wallis and Dunn). The association between apoptotic, anti-apoptotic, proliferative and hormonal immunoreactions was determined by the Principal Coordinate Analysis (PCoA) of the R software. In A. nancymaae and S. macrocephalus there was a significant difference in the quantification between primordial and small antral, primordial and large antral, and primary and large antral (Kruskal-Wallis, p<0.05), in the three reproductive stages. Protein and hormonal markers varied significantly between cell types of A. nancymaae (p=0.001) and S. macrocephalus (p=0.002). Immunoreaction to Caspase-3- activated was observed in the stroma and follicular cells of primary follicles, small antral, large antral (granulosa cells, oocytes, thecal cells), in addition to the corpus luteum, in the three reproductive phases. Immunoreaction to Bcl-2 was also observed in granulosa cells and oocytes from preantral and antral follicles; and PCNA immunoreaction in oocyte nuclei and cytoplasm of primordial and primary follicles, in the gonads of females in the luteal stage, in primordial follicles in pregnant females, and in normal and atresic primordial follicles of females in the follicular stage; and also, immunoreaction for AMH in granulosa cells and oocytes from maturing antral follicles. Thus, immunostaining techniques for Caspase-3, Bcl2, PCNA and AMH proteins were essential to determine the analysis of ovarian dynamics, in order to provide data that suggest evaluating whether follicles are in a state of atresia or development and the hormone production acting in the folliculogenesis process of these species.

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