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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220397

Resumo

O produto natural Cromomicina A5 (CA5) tem se destacado como um promissor agente quimioterápico, pois possui efeito citotóxico comprovado sobre várias linhagens de células cancerígenas. No entanto, esses efeitos poderão se estender às células saudáveis, inclusive às células germinativas. Assim, a associação de quimioterápicos com substâncias com potencial antioxidante, como o ácido alfa-lipóico (ALA), pode minimizar os efeitos indesejáveis. Dessa forma, objetivamos verificar a dose letal média (DL50) de CA5 na maturação in vitro de oócitos bovinos e avaliar se o ALA é capaz de atenuar os efeitos tóxicos causados pela CA5. Para isso, no experimento 1, oócitos foram maturados in vitro na ausência (TCM-199+ - controle) ou presença de diferentes concentrações de CA5 (50 nM; 80 nM; 100 nM; 200 nM) para definir a concentração da DL50. Já no experimento 2, oócitos foram maturados na ausência (TCM-199+ - controle) ou na presença de 200 nM de CA5 (CA5200), 100 nM de doxorrubicina (DXR100), 100 M de ALA (ALA100) ou na associação de 200 nM de CA5 e 100 M de ALA (CA5+ALA). Após o período de maturação, os oócitos foram submetidos a análise da morfologia da cromatina e do envelope nuclear; níveis intracelulares de espécies reativas de oxigênio (EROs); potencial de membrana mitocondrial (PMM) e expressão das proteínas - catenina e caderinas. Os dados do experimento 1 mostraram que a concentração de 200 nM de CA5 resultou nas menores taxas de oócitos em metáfase II (MII), comparado ao controle, sendo definida como DL50. No experimento 2, os tratamentos ALA e CA5+ALA apresentaram maiores taxas de MI comparados ao controle. Por outro lado, os tratamentos DXR, CA5 e CA5+ALA apresentaram menores taxas de MII do que o controle. Além disso, os tratamentos CA5 e CA5+ALA apresentaram taxas de MII inferiores aos oócitos expostos somente ao ALA. Resultados similares foram observados para a taxa de degeneração oocitária, tanto com relação ao ALA, quanto ao controle. Em relação aos níveis de EROs os tratamentos ALA e CA5+ALA foram inferiores ao controle. Além disso, os níveis de EROs no tratamento ALA foram inferiores aos observados na presença de DXR. O PMM foi menor no tratamento ALA do que no controle e DXR, não diferindo dos oócitos expostos à CA5 e CA5+ALA. Além disso, o PMM do tratamento DXR foi maior do que na presença apenas da CA5. Foi observada uma menor expressão para a -catenina nos oócitos expostos à DXR, CA5 e CA5+ALA, comparados ao controle. A expressão das caderinas, foi inferior nos oócitos expostos à CA5+ALA, comparado ao controle e ALA. Além disso, foi observada correlação positiva na expressão de -catenin e caderinas com taxa de MII. Por outro lado, a correlação entre a expressão de -catenina e a taxa de degeneração oocitária foi negativa. Em conclusão, este estudo mostrou que a DL50 de CA5 para oócitos bovinos maturados in vitro é 200 nM e que embora a CA5 tenha causado toxicidade aos oócitos, o ALA revelou um grande potencial para atenuar esses efeitos.

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The natural product Chromomycin A5 (CA5) has stood out as a promising chemotherapeutic agent, as it has a proven cytotoxic effect on several cancer cell lines. However, these effects may extend to healthy cells, including germ cells. Thus, the association of chemotherapy with substances with antioxidant potential, such as alpha-lipoic acid (ALA), can minimize undesirable effects. Thus, we aimed to verify the mean lethal dose (LD50) of CA5 in the in vitro maturation of bovine oocytes and assess whether ALA is able to attenuate the toxic effects caused by CA5. For this, in experiment 1, oocytes were matured in vitro in the absence (TCM- 199+ - control) or presence of different concentrations of CA5 (50 nM; 80 nM; 100 nM; 200 nM) to define the LD50 concentration. In experiment 2, oocytes were matured in the absence (TCM-199+ - control) or in the presence of 200 nM of CA5 (CA5200), 100 nM of doxorubicin (DXR100), 100 M of ALA (ALA100) or in the association of 200 nM CA5 and 100 M ALA (CA5+ALA). After the maturation period, the oocytes were submitted to chromatin and nuclear envelope morphology analysis; intracellular levels of reactive oxygen species (ROS); mitochondrial membrane potential (MMP) and expression of -catenin and cadherins proteins. Data from experiment 1 showed that the concentration of 200 nM of CA5 resulted in lower metaphase II (MII) oocyte rates compared to the control, being defined as LD50. In experiment 2, the ALA and CA5+ALA treatments had higher MI rates compared to the control. On the other hand, the DXR, CA5 and CA5+ALA treatments had lower IIM rates than the control. Furthermore, the CA5 and CA5+ALA treatments had lower MII rates than oocytes exposed only to ALA. Similar results were observed for the rate of oocyte degeneration, both for ALA and for the control. Regarding ROS levels, treatments ALA and CA5+ALA was lower than the control. Furthermore, ROS levels in the ALA treatment were lower than those observed in the presence of DXR. The PMM was lower in the ALA treatment than in the control and DXR, not differing from oocytes exposed to CA5 and CA5+ALA. Furthermore, the PMM of the DXR treatment was higher than in the presence of only CA5. A lower expression for -catenin was observed in oocytes exposed to DXR, CA5 and CA5+ALA, compared to the control. The expression of cadherins was lower in oocytes exposed to CA5+ALA, compared to control and ALA. Furthermore, a positive correlation was observed in the expression of -catenin and cadherins with the rate of MII. On the other hand, the correlation between the expression of - catenin and the rate of oocyte degeneration was negative. In conclusion, this study showed that the LD50 of CA5 for in vitro matured bovine oocytes is 200 nM and that although CA5 caused toxicity to oocytes, ALA revealed a great potential to attenuate these effects.

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