MODELO HEPÁTICO EX VIVO EM SUÍNOS: EFEITO DO ACETAMINOFENO, DA FUMONISINA E DO ÁCIDO FÍTICO

RESUMO

Devido à similaridade orgânica ao homem, suínos são utilizados como modelos 8 experimentais. Os explantes ex vivo são promissores na avaliação de xenobióticos no 9 organismo. Assim, objetivou-se avaliar os efeitos da fumonisina (FB1), acetaminofeno 10 e do ácido fítico (IP6) utilizando-se o modelo de explante hepático de suínos. Foram 11 realizados dois experimentos, nos quais foram analisados resposta ao estresse 12 oxidativo, morfologia e biomarcadores hepáticos. O experimento (E1) avaliou o efeito 13 de IP6 (5mM) nos explantes expostos ao acetaminofeno (20mM). Utilizou-se nove 14 suínos de terminação provenientes de frigoríficos (grupo experimental 1 - GE1) e seis 15 suínos com 40 dias (grupo experimental 2 - GE2), estes eutanasiados. Os explantes 16 (8 mm) passaram pelos seguintes tratamentos durante quatro horas controle 4h 17 (somente meio); IP6 (5mM); acetaminofeno (20mM) e IP6 + acetaminofeno. Explantes 18 não incubados (Ctrl 0h) foram colhidos para comparação com incubados (Ctrl 4h). Os 19 sobrenadantes foram colhidos após 1/2h, 2h e 4h de incubação para análise de 20 biomarcadores (ALT, AST, FA, GGT, proteína e colesterol). Após 4h, (3/tratamento) 21 foram fixados, processados para análise histológica ou congelados (2/tratamento) a - 22 80ºC, para avaliação do estresse oxidativo substâncias reativas ao ácido 23 tiobarbitúrico (TBARS), tetrazólio de nitroazul (NBT), capacidade antioxidante por 24 meio da glutationa reduzida (GSH), potencial de redução do ferro (FRAP) e 25 capacidade de eliminação de radicais livres (ABTS). Para GE1 e GE2, na presença 26 de IP6, observou-se atividade enzimática menor de GGT e FA em relação ao controle. 27 Com acetaminofeno, a atividade enzimática (FA, AST, ALT), PT e colesterol reduziram 28 comparado ao controle. Para o GE2, notou-se queda de FA e ALT para acetaminofeno 29 mais IP6 em relação ao controle. Os explantes incubados apenas com meio de cultura 30 (Ctrl 4h) apresentaram aspectos histológicos similares aos não incubados (Ctrl 0h). 31 Assim, a incubação não interferiu na integridade do tecido. Para o ensaio TBARS 32 (GE1), ocorreu diferença entre controle 4h e acetaminofeno, menor para este último. 33 Estes achados indicam que provavelmente não houve peroxidação lipídica nos 34 explantes expostos ao acetaminofeno. Houve redução da GSH no grupo exposto ao 35 IP6. Para o GE2, houve aumento da capacidade antioxidante (GSH, FRAP e ABTS) 36 do grupo acetaminofeno comparado com controle 4h, IP6 e acetaminofeno acrescido 37 de IP6 e para o NBT diferença entre controle 4h e acetaminofeno, maior para este 38 último, indicando possível lesão oxidativa. No segundo experimento (E2), a 39 metodologia foi similar ao primeiro, sendo os explantes submetidos aos tratamentos 40 controle 0h; controle 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. Não houve diferença no 41 escore da lesão entre GE1 e GE2. Para o GE1 e GE2, os tratamentos IP6 e FB1 + IP6 42 diminuíram a atividade de FA em relação ao controle e FB1. Quando o IP6 foi 43 adicionado ao FB1, reduziu a atividade de ALT e PT comparado ao FB1 e ao controle. 44 Para o GE1 e GE2, a FB1 induziu ao aumento de GSH comparado ao IP6 e controle, 45 respectivamente, enquanto a incubação com FB1 + IP6 dimininui GSH em 46 comparação ao FB1. Os resultados obtidos evidenciaram uma ação protetora do IP6. 47

ABSTRACT

Due to the organic similarity to man, pigs are used as experimental models. Ex 6 vivo explants are promising in the evaluation of xenobiotics in the body. Thus, the 7 objective was to evaluate the effects of fumonisin (FB1), acetaminophen and phytic 8 acid (IP6) using the swine liver explant model. Two experiments were carried out, in 9 which it where analyzed response to oxidative stress, liver morphology and 10 biomarkers. The experiment (E1) evaluated the effect of IP6 (5mM) on explants 11 exposed to acetaminophen (20mM). Nine finishing pigs were used from 12 slaughterhouses (experimental group 1 - GE1) and six 40-day-old pigs (experimental 13 group 2 - GE2) were used, euthanized. The explants (8 mm) underwent the following 14 treatments for four hours control 4h (media only); IP6 (5mM); acetaminophen (20mM) 15 and IP6 + acetaminophen. Un incubated explants (Ctrl 0h) were collected for 16 comparison with incubated. Supernatants were collected after 1 / 2h, 2h and 4h of 17 incubation for analysis of biomarkers (ALT, AST, FA, GGT, protein and cholesterol). 18 After 4h, (3 / treatment) were fixed, processed for histological analysis or frozen (2 / 19 treatment) at -80ºC, to assess oxidative stress substances reactive to thiobarbituric 20 acid (TBARS), nitro-blue tetrazolium (NBT) and capacity antioxidant by means of 21 reduced glutathione (GSH), iron reduction potential (FRAP) and ability to eliminate free 22 radicals (ABTS). For GE1 and GE2, in the presence of IP6, less GGT and FA enzyme 23 activity was observed compared to the control. With acetaminophen, the enzymatic 24 activity (FA, AST, ALT), PT ando cholesterol decreased compared to the control. For 25 GE2, there was a decrease in FA and ALT for acetaminophen plus IP6 compared to 26 control. The explants incubated only with culture media (Ctrl 4h) presented similar 27 histological aspects to those not incubated (Ctrl 0h). Thus, incubation did not interfere 28 with tissue integrity. For the TBARS trial (GE1), there was a difference between the 4h 29 control and acetaminophen, which was smaller for the latter. These findings indicate 30 that there was probably no lipid peroxidation in the explants exposed to 31 acetaminophen. There was a reduction in GSH in the group exposed to IP6. For GE2, 32 there was an increase in the antioxidant capacity (GSH, FRAP and ABTS) of the 33 acetaminophen group compared to the 4h control, IP6 and acetaminophen plus IP6 34 and for the NBT, the difference between the 4h control and acetaminophen, greater for 35 the latter, indicating possible oxidative damage. In the second experiment (E2), the 36 methodology was similar to the first, with the explants subjected to treatments control 37 0h; control 4h; IP6 (5mM); FB1 (100 M); FB1 + IP6. There was no difference in the 38 injury score between GE1 and GE2. For GE1 and GE2, treatments IP6 and FB1 + IP6 39 decreased the activity of AF in relation to control and FB1. When IP6 was added to 40 FB1, it reduced the activity of ALT and PT compared to FB1 and the control. For GE1 41 and GE2, FB1 induced an increase in GSH compared to IP6 and control, respectively, 42 while incubation with FB1 + IP6 decreased GSH compared to FB1. The results 43 obtained showed a protective action of IP6.