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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220768

Resumo

A maturação oocitária é um complexo bem orquestrado que culmina na liberação de um oócito capaz de ser fertilizado, permitindo assim, o desenvolvimento embrionário. A maturação in vitro (MIV) é uma das etapas determinantes para o sucesso da produção in vitro de embriões (PIVE) e a não competência oocitária nesta fase altera drasticamente a taxa de produção embrionária. Apesar de todos os esforços para a melhoria da PIVE, apenas uma parcela de 35 a 40% dos oócitos bovinos maturados in vitro, desenvolvem-se até o estádio de blastocisto. Acredita-se que a falta de sincronia existente entre a maturação nuclear e a maturação citoplasmática oocitária seja um fator limitante na qualidade da PIVE. Dessa forma, o uso de reguladores durante a MIV, tem se destacado e melhorado a sincronia da maturação nuclear e citoplasmática dos oócitos, e consequentemente, a taxa de produção embrionária. Nesse contexto, o presente estudo teve como finalidade avaliar a influência dos reguladores de maturação - hormônio folículo estimulante (FSH), monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) e gonadotrofina coriônica humana (hCG), e suas combinações - na presença de albumina sérica bovina (BSA) como fonte protéica, sobre a MIV de oócitos bovinos, comparados ao grupo controle, com soro fetal bovino (SFB) sem adição dos reguladores. Foram formados dez grupos experimentais (T1: SFB, T2: FSH, T3: AMPc, T4: hCG, T5: FSH+AMPc, T6: FSH+hCG, T7: AMPc+hCG, T8: FSH+AMPc+hCG e T9: (FSH+AMPC) por 12 horas + hCG nas outras 12 horas, T10: BSA). Foram avaliadas as taxas de maturação nuclear e citoplasmática, de acordo com a presença de metáfase II (MII), migração dos grânulos corticais e mitocôndrias, capacidade em produzir embriões e acúmulo lipídico embrionário. Os resultados demonstraram que o uso do BSA durante a MIV provocou atraso na retomada da meiose em todos os grupos experimentais analisados, comparados à maturação com SFB (p < 0,05). Porém, a distribuição de grânulos corticais e de mitocôndrias no ooplasma, bem como a taxa de produção embrionária, apresentaram melhores resultados quando o SFB foi utilizado (p < 0,05). Além disso, a substituição do SFB pelo BSA na MIV não reduz os níveis lipídicos dos embriões produzidos in vitro (PIV) (p > 0,05). Conclui-se que, o uso do BSA durante a MIV de oócitos bovinos, permite o atraso da reativação da meiose, contudo, a presença do SFB nessa etapa é de suma importância para a maturação das organelas citoplasmáticas e na produção in vitro de embriões bovinos.

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Oocyte maturation is a well-orchestrated complex that culminates in the release of an oocyte capable of being fertilized, thus allowing embryonic development. In vitro maturation (IVM) is one of the determining steps for the success of in vitro production of embryos (IVPE) and the lack of oocyte competence in this phase dramatically changes the rate of embryonic production. Despite all efforts to improve IVPE, only a portion of 35 to 40% of bovine oocytes matured in vitro, develop until the blastocyst stage. It is believed that the lack of synchrony between nuclear maturation and oocyte cytoplasmic maturation is a limiting factor in the quality of IVPE. Thus, the use of regulators during IVM, has highlighted and improved the synchrony of oocyte nuclear and cytoplasmic maturation, and consequently, the rate of embryonic production. In this context, the present study aimed to evaluate the influence of maturation regulators - follicle stimulating hormone (FSH), cyclic adenosine monophosphate (cAMP) and human chorionic gonadotropin (hCG), and their combinations - in the presence of bovine serum albumin (BSA) as a protein source, on the bovine oocyte IVM, compared to the control group, with fetal bovine serum (FBS) without the addition of regulators. Ten experimental groups were formed (T1: FBS, T2: FSH, T3: cAMP, T4: hCG, T5: FSH + cAMP, T6: FSH + hCG, T7: cAMP + hCG, T8: FSH + cAMP + hCG and T9: (FSH + cAMP) for 12 hours + hCG in the other 12 hours, T10: BSA). Nuclear and cytoplasmic maturation rates were evaluated according to the presence of metaphase II (MII), migration of cortical granules and mitochondrias, ability to produce embryos and embryonic lipid accumulation. The results demonstrated that the use of BSA during IVM caused a delay in the resumption of meiosis in all experimental groups analyzed, compared to maturation with FBS (p < 0,05). However, the distribution of cortical granules and mitochondrias in the ooplasm, as well as the rate of embryonic production, showed better results when FBS was used (p < 0,05). In addition, the replacement of FBS by BSA in IVM does not reduce the lipid levels of embryos produced in vitro (IVP) (p> 0.05). It is concluded that the use of BSA during IVM of bovine oocytes allows the delay of meiosis reactivation, however, the presence of FBS in this stage is of paramount importance for the maturation of cytoplasmic organelles and in vitro production of embryos bovine.

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