AVALIAÇÃO IN VITRO E IN VIVO DO SÊMEN EQUINO SUBMETIDO A DIFERENTENTES TRATAMENTOS APÓS A DESCONGELAÇÃO

RESUMO

Nesta Tese, constituída de dois experimentos, objetivou-se testar, in vitro e in vivo, a adição de diferentes pós-diluentes ao sêmen equino descongelado e seus efeitos sobre a motilidade espermática e a atividade da acrosina imediatamente após o descongelamente e durante o teste de termoresistência (TTR). A avaliação in vivo foi realizada considerando-se a fertilidade de éguas artificialmente inseminadas. O sêmen foi envasado em palhetas de 4 mL, descongelado a 50°C por 40 segundos e incubado a 37ºC no TTR durante 90 e 120 minutos, respectivamente, no primeiro e no segundo experiemento. No primeiro adicionou-se a Solução Ringer e o Diluente Merk ao sêmen de dois reprodutores (R1 e R2). Somente a motilidade progressiva no sêmen do R2 decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (14.3±7.7; 3.3±2.7) em relação ao acrescido do Diluente Merk (23.0±2.7; 10.0±0.0), não diferindo daquele acrescido da Solução Riger (20.0±5.0; 8.0±4.4). A motilidade total no sêmen de ambos os animais decresceu (P<0.05), respectivamente, aos 60 e 90 minutos no sêmen do grupo Controle (R1= 26.0±4.1 vs 7.0±2.7; R2= 20.0±3.5 vs 6.0±2.2) em relação ao acrescido da Solução Ringer (R1= 35.0±5.0 vs 19.0±6.5; R2= 32.0±3.7 vs 13.0±2.7) e do Diluente Merk (R1= 40.0±5.0 vs 23.0±6.7; R2= 38.0±5.7 vs 22.0±2.7). A atividade da acrosina no sêmen de ambos os animais não diferiu (P>0.05) entre os tratamentos, mas a atividade no sêmen do R1 foi superior (P<0.05) a do R2 em todas as avaliações no TTR. Imediatamente após o descongelamento e após 90 minutos do TTR, a atividade dessa enzima (%) no sêmen do grupo Controle foi, respectivamente, de 89.6±1.6 vs 81.4±1.8 (R1) e de 86.6±1.9 vs 73.8±3.5 (R2), no acrescido da Solução Ringer foi de 89.1±1.6 vs 81.4±1.3 (R1) e de 87.0±1.5 vs 74.2± (R2) e no acrescido do Diluente Merk foi de 89.2±1.3 vs 81.8±1.0 (R1) e de 86.9±1.6 vs 74.6±3.3 (R2). A prenhez (%) com o sêmen do grupo Controle foi de 50.0 (R1) e 20.0 (R2), com o acrescido da Solução Ringer foi de 50.0 (R1) e 30.0 (R2) e com o acrescido do Diluente Merk foi de 60.0 (R1) e 30.0 (R2) não havendo diferença (P>0.05) entre os tratamentos e entre os animais. No segundo experimento adicionou-se ao sêmen de 10 reprodutores, as soluções Fisiológica, Tyrode ou o Diluente de Congelamento sem conter glicerol. A motilidade progressiva decresceu (P<0.05) a partir de 30 minutos no sêmen descongelado (44.3±7.7 vs viii 33.6±11.6) e no da Solução Fisiológica (44.3±7.9 vs 35.4±11.5) e somente a partir de 60 minutos no sêmen contendo solução tyrode (44.4±8.1 vs 28.6±12.2) ou Diluente de Congelamento (44.4±8.1 vs 28.7±13.2). A motilidade total decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos no sêmen descongelado (53.1±6.1 vs 37.5±13.4) e no da Solução Fisiológica (53.2±6.0 vs 40.1±11.4) e somente a partir de 90 minutos no sêmen contendo Solução Tyrode (53.5±6.3 vs 36.8±12.5) ou Diluente de Congelamento (53.6±5.9 vs 37.9±14.3). A atividade da acrosina quantificada no início do TTR (92.5±6.2) somente decresceu (P<0.05) a partir de 60 minutos sem diferir (P>0.05) entre os tratamentos. Ao término do TTR, sua atividade no sêmen descongelado (71.8±9.9) também não diferiu (P>0.05) daquelas do sêmen diluído com Solução Fisiológica (70.2±9.2), Solução Tyrode (70.2±10.2) e Diluente de Congelamento (69.0±9.7). Os resultados de prenhez obtidos com a inseminação artificial utilizando o sêmen descongelado (37.8%) não diferiu (P<0.05) daqueles com o sêmen diluído em Solução Fisiológica (40.0%), Solução Tyrode (38.5%) ou Diluente de Congelamento (34.7%). Os resultados permitem concluir que a precisão diagnóstica da motilidade espermática é igualmente eficiente aquela da atividade da acrosina e que ambas podem ser utilizadas para predizer a capacidade fecundante dos espermatozóides. Ainda permitem concluir que a adição de pós-diluentes ao sêmen descongelado não contribui para aumentar fertilidade de éguas artificialmente inseminadas.

ABSTRACT

In this thesis, consisting of two experiments, aimed to test, in vitro and in vivo, the addition of different post-diluents to thawed equine semen and their effects on sperm motility and acrosine activity immediately after thawing and during the test. Resistance Resistance (TTR). In vivo evaluation was performed considering the fertility of artificially inseminated mares. Semen was packaged in 4 mL straws, thawed at 50 ° C for 40 seconds and incubated at 37 ° C in TTR for 90 and 120 minutes, respectively, in the first and second experiments. In the first, Ringer's Solution and Merk Diluent were added to the semen of two breeders (R1 and R2). Only the progressive motility in R2 semen decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (14.3 ± 7.7; 3.3 ± 2.7) in relation to the Merk Diluent plus (23.0 ± 2.7; 10.0 ± 0.0), not differing from that added with the Riger Solution (20.0 ± 5.0; 8.0 ± 4.4). The total semen motility of both animals decreased (P <0.05), respectively, at 60 and 90 minutes in the Control group semen (R1 = 26.0 ± 4.1 vs 7.0 ± 2.7; R2 = 20.0 ± 3.5 vs 6.0 ± 2.2) in increase of Ringer's Solution (R1 = 35.0 ± 5.0 vs 19.0 ± 6.5; R2 = 32.0 ± 3.7 vs 13.0 ± 2.7) and Merk Diluent (R1 = 40.0 ± 5.0 vs 23.0 ± 6.7; R2 = 38.0 ± 5.7 vs 22.0 ± 2.7). The acrosine activity in semen of both animals did not differ (P> 0.05) between treatments, but the activity in semen of R1 was higher (P <0.05) than of R2 in all TTR evaluations. Immediately after thawing and after 90 minutes of TTR, the activity of this enzyme (%) in the Control group semen was, respectively, 89.6 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.8 (R1) and 86.6 ± 1.9 vs 73.8 ± 3.5 (R2). , plus Ringer's Solution was 89.1 ± 1.6 vs 81.4 ± 1.3 (R1) and 87.0 ± 1.5 vs 74.2 ± (R2) and plus Merk Diluent was 89.2 ± 1.3 vs 81.8 ± 1.0 (R1) and 86.9 ± 1.6 vs 74.6 ± 3.3 (R2). Pregnancy (%) with Control group semen was 50.0 (R1) and 20.0 (R2), with Ringer's Solution plus 50.0 (R1) and 30.0 (R2) and with Merk Diluent plus 60.0. (R1) and 30.0 (R2) with no difference (P> 0.05) between treatments and between animals. In the second experiment was added to the semen of 10 breeders, Physiological solutions, Tyrode or Freezing Diluent without glycerol. Progressive motility decreased (P <0.05) from 30 minutes in thawed semen (44.3 ± 7.7 vs 33.6 ± 11.6) and in Physiological Solution (44.3 ± 7.9 vs 35.4 ± 11.5) and only from 60 minutes in semen containing tyrode solution (44.4 ± 8.1 vs 28.6 ± 12.2) or Freezing Diluent (44.4 ± 8.1 vs 28.7 ± x 13.2). Total motility decreased (P <0.05) from 60 minutes in thawed semen (53.1 ± 6.1 vs 37.5 ± 13.4) and in Physiological Solution (53.2 ± 6.0 vs 40.1 ± 11.4) and only from 90 minutes in semen containing Tyrode Solution (53.5 ± 6.3 vs 36.8 ± 12.5) or Freezing Diluent (53.6 ± 5.9 vs 37.9 ± 14.3). Acrosine activity quantified at the onset of TTR (92.5 ± 6.2) only decreased (P <0.05) from 60 minutes without differing (P> 0.05) between treatments. At the end of TTR, its activity in thawed semen (71.8 ± 9.9) also did not differ (P> 0.05) from those of semen diluted with Physiological Solution (70.2 ± 9.2), Tyrode Solution (70.2 ± 10.2) and Freezing Diluent (69.0 ± 9.7). Pregnancy results obtained with artificial insemination using thawed semen (37.8%) did not differ (P <0.05) from those with semen diluted in Physiological Solution (40.0%), Tyrode Solution (38.5%) or Freezing Diluent (34.7%). ). The results allow us to conclude that the diagnostic accuracy of sperm motility is equally efficient as that of acrosine activity and that both can be used to predict sperm fertilization capacity. It is also concluded that the addition of post-diluents to thawed semen does not contribute to increase fertility of artificially inseminated mares.