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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220800

Resumo

Os Pestivírus são membros do gênero Pestivirus, família Flaviviridae e classificados em 11 espécies pelo ICTV (Pestivirus A ao K). Os Pestivirus são vírus com envelope esférico, com polaridade positiva de RNA de fita simples, genoma completo de 12,5 kb, sua ORF codifica uma poliproteína de 3.998 aminoácidos, com dois produtos genéticos únicos (Npro e Erns). Infecções causadas por Pestivirus A, B e H são similares. Pestivirus H já foi detectado por RT-PCR codificando os genes 5´UTR, Npro e E2 em sangue, soro e órgãos de bovinos, contudo, não há associação com sinais neurológicos. O presente trabalho descreve a primeira detecção de Pestivirus H em tecidos do sistema nervoso central de um bezerro com sinais clínicos neurológicos e suas características molecular, histológica e imunohistoquímica. O bezerro apresentava síndrome cerebelar e morreu 20 dias após a internação e foi necropsiado. Fragmentos de SNC, coração, fígado, rim, pulmão, intestino e baço foram submetidos a RT-PCR. Amostras de tecido do SNC e linfonodo mesentérico foram processadas para avaliação histopatológica e imunohistoquímica. Os fragmentos de rim, SNC e intestino foram positivos para a região 5'UTR, SNC e intestino foram positivos para a região Npro. Os melhores amplicons nos ensaios de RT-PCR, 5UTR (SNC) e Npro (SNC e intestino) foram sequenciados e a sequência de nucleotídeos e a análise filogenética para a cepa 5'UTR exibiram 93,6 a 99,4%, 85%, 89,4 a 89,9% e 85,7% de identidade nt com as cepas de Pestivirus H subgrupo a, b, c e d, respectivamente, e 71,5 % e 75,6% de identidade nt com a cepa de Pestivirus A (NADL) e Pestivirus B (890), respectivamente. As cepas Npro mostraram 99,7% de identidade nt entre si e 90,2 a 96,5% de identidade nt com outras cepas de Pestivirus H e 67,3 a 67,5% e 66,3 a 66,5% de identidade nt com cepa de Pestivirus A (NADL) e Pestivirus B (890), respectivamente. As alterações histopatológicas incluíram necrose neuronal no cérebro, e necrose e degeneração de células Purkinje do cerebelo. Houve imunorreatividade para antígenos do BVDV no córtex cerebral, cérebro e medula espinhal. Este estudo fornece informações sobre o Pestivirus H em tecidos do SNC em bezerro com sinais neurológicos, sugerindo a inclusão do Pestivirus H na investigação etiológica de síndromes neurológicas.

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Pestiviruses are members of the genus Pestivirus, family Flaviviridae and classified into 11 species recognized by ICTV (Pestivirus A to K). Pestiviruses are spherical enveloped viruses, single-stranded RNA positive-polarity, its complete genome is 12.5 kb and their ORF encodes a 3,998 amino acid polyprotein with two unique genetic products (Npro and Erns). Infections caused by Pestivirus A, B and H are similar. Pestivirus H has already been detected by RT-PCR encoding the 5´UTR, Npro and E2 genes in blood, serum and several bovine organs, however, there are no association with neurological signs. The present study describes the first detection of Pestivirus H in tissues of the central nervous system of a calf with neurological clinical signs, and its molecular, histological and immunohistochemical characteristics. The calf presented cerebellar syndrome and died 20 days after hospitalization, being necropsied. Fragments of CNS, heart, liver, kidney, lung, intestine and spleen were submitted to RT-PCR. Samples of CNS and mesenteric lymph node were processed for histopathological and immunohistochemistry evaluation. The kidney, CNS, and intestine fragments were positive to 5UTR region, CNS and intestine fragments were positive to Npro region. The better amplicons in the 5UTR (CNS) and Npro (CNS and intestine) RT-PCR assays were sequenced and the nucleotide sequence and phylogenetic analysis to the 5UTR strain exhibited 93.6 to 99.4%, 85%, 89.4 to 89.9%, and 85.7% of nt identity with Pestivirus H strains subgroup a, b, c, and d, respectively, and 71.5% and 75.6% of nt identity with Pestivirus A strain (NADL) and Pestivirus B (890), respectively. The Npro strains showed 99.7% of nt identity to each other and 90.2 to 96.5% of nt identity with other Pestivirus H strains and 67.3 to 67.5% and 66.3 to 66.5% of nt identity with Pestivirus A (NADL) and Pestivirus B (890), respectively. The histopathologic alterations included neuronal necrosis at the cerebrum and moderate necrosis and degeneration of Purkinje cells of the cerebellum. There was positive immunoreactivity for antigens of BVDV in cerebral cortex, cerebrum and spinal cord. This study provides information about the Pestivirus H in CNS tissues of a calf with neurological signs, suggesting the inclusion of Pestivirus H in the etiological investigation of neurological syndromes.

Biblioteca responsável: BR68.1