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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220817

Resumo

Os compostos mesoiônicos sintéticos, que pertencem ao grupo 1,3-tiazólio-5-tiolato, possuem capacidade de atravessar membranas celulares e interagir com diversas moléculas biológicas com afinidades distintas. Este estudo teve como objetivo a avaliar o potencial antineoplásico de um novo composto mesoiônico MIH2.4Bl do grupo 1,3tiazólio-5-tiolato em linhagens celulares de câncer de mama. Para esse estudo formam cultivadas doze linhagens de mama, duas normais (MCF10A e HMEC) e dez cancerígenas, das quais oito são linhagens de câncer humano (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA-MB-436, T47-D, ZR 75-1) e 2 linhagens de câncer de ratos (MM2MT e MM3MG). Pelo teste de cristal violeta determinamos que o composto MIH 2.4Bl apresentou atividade de inibição do crescimento em nove (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T-47D e ZR-75-1) das dez das linhagens de câncer de mama testadas, porém quatro linhagens (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D e ZR-75-1) mostraram atividade inibitória significativamente maior do que a linhagem normal HMEC. Os valores de IC 50 foram determinados para todas as doze linhagens celulares nos tempos de 48, 72 e 96 horas. Análise adicional de citotoxicidade mediada por MIH 2.4Bl foi realizada em diferentes concentrações e tempos de tratamento utilizando a linhagem celular MCF-7, observando que essa linhagem teve sua viabilidade diminuida dependentes da dose e do tempo, com efeito citotoxico máximo em 72 e 96 horas. Três linhagens de células de câncer de mama (MCF-7, T-47D e ZR-75-1) mostraram um índice de seletividade mais potente à inibição de crescimento por MIH 2.4Bl quando comparado com a linhagem normal(HMEC) . Sendo a linhagem MCF7 a que apresentou o maoir índice de seletividade em 2 dos 3 tempos testados. Alterações no ciclo celular, também foram observadas na linhagem MCF7 após tratamento com o mesoinico, ocorrendo um aumento do número de células na fase G2/M em 34,2% em comparação com 0,1% nas células sem tratamento, para essa analise utilizamos o teste de iodeto de propídio, por citometria de fluxo. Os tipos de morte induzidas pelo composto MIH2.4Bl na linhagem MCF7, foram analisados por microscopia eletônica e ensaio de TUNEL os quais detectaram alterações na morfologia nuclear, degeneração mitocondrial e danos no DNA da célula, nas concentrações testadas (37.5 e 75 M), sugerindo uma possível morte por 15 apoptose. A morte autofágica também foi induzida, observadas pelo aumento de expressão das proteinas envolvidas no processo autofágico (Beclin 1, ATG-5 e LC3B II/I). Pelo teste de seahorse foi detectado que o tratamento com o composto MIH2.4Bl causou disfinção mitocondrial na linhagem MCF7. Com relação à análise da expressão dos genes observou-se que os genes AMIGO2 e DKK1 tiveram seus níveis de expressão significativamente dimuídos na linhagem MCF7 após tratamento com o composto quando comparados com o controle (linhagem MCF7 tratada com 0.01% DMSO) e os genes ATF3, HBEGF, RGS2, and ACRC tiveram seus níveis de expressão aumentados após o tratamento em relação ao controle (linhagem tratada com 0.01% DMSO) esses resultados foram obtidos da análise de PCR em tempo real. Portanto esses resultados sugerem que o composto MIH2.4Bl é um candidto promissor para o tratamento de câncer de mama e apoia mais invetigação in vitro e in vivo.

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Synthetic mesoionic compounds, which belong to the 1,3-thiazolium-5-thiolate group, have the ability to cross cell membranes and interact with different biological molecules with different affinities. This study aimed to evaluate the antineoplastic potential of a new mesoionic compound MIH2.4Bl from the 1,3thiazolium-5-thiolate group in breast cancer cell lines. For this study formed cultured breast lines, two normal (MCF10A and HMEC) and ten breast cancers, of which eight are human cancer lines (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA - MB-436, T47-D, ZR 75-1) and 2 mouse cancer lines (MM2MT and MM3MG). The crystal violet test determines the compound MIH 2.4Bl which shows growth inhibition activity in nine (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T- 47D and ZR-75-1) of the ten breast cancer lines tested, but four lines (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D and ZR-75-1) larger than HMEC normal strain . IC 50 values were selected for all cell lines at 48, 72 and 96 hours. The additional analysis of cytotoxicity mediated by MIH 2.4Bl was carried out in different tests and times of use of the MCF-7 cell line, noting that the line had its viability decreased depending on the dose and time, with maximum cytotoxic effect in 72 and 96 hours. Three breast cancer cell lines (MCF-7, T-47D and ZR-75-1) show a more potent selectivity index for inhibiting growth by MIH 2.4Bl when compared to a normal strain (HMEC). Being an MCF7 strain, which exhibits the highest selectivity index in 2 of the 3 times tested. Changes in the cell cycle were also observed in the MCF7 line after treatment with mesoinic, with an increase in the number of cells in the G2 / M phase by 34.2% compared to 0.1% in cells without treatment. propidium iodide test, by flow cytometry. The types of death induced by the compound MIH2.4Bl in the MCF7 line, were analyzed by electron microscopy and TUNEL assay, which changes were detected in nuclear morphology, mitochondrial degeneration and damage to the cell's DNA, in the tested tests (37.5 and 75 M), suggesting a possible death from apoptosis. Automatic death was also induced, observed by the increased expression of proteins used in the automatic process (Beclin 1, ATG-5 and LC3B II / I). The seahorse test was detected as a treatment with MIH2.4Bl caused a mitochondrial difference in the MCF7 strain. Regarding the analysis of the expression of genes subject to AMIGO2 and DKK1 genes, expression levels are decreased in the MCF7 17 line after treatment with compound or when compared to control (MCF7 line treated with 0.01% DMSO) and the ATF3, HBEGF genes , RGS2 and ACRC had their expression levels increased after treatment in relation to the control (lineage treated with 0.01% DMSO), these results were submitted to real-time PCR analysis. Therefore, these results separate MIH2.4Bl as a promising promoter for the treatment of breast cancer and further support in vitro and in vivo research.

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