Caracterização celular da hemolinfa e avaliação da resposta celular após exposição in vitro ao fluazuron de fêmeas ingurgitadas de Amblyomma sculptum.

RESUMO

Pertencente ao complexo Amblyomma cajennense, o carrapato Ambyomma sculptum pode ser encontrado as várias regiões do Brasil. É conhecido como carrapato estrela ou carrapato do cavalo e parasita animais domésticos, silvestres e humanos, sendo o principal transmissor de Rickettsia rickettsii, agente etiológico da Febre Maculosa Brasileira. Possui grande importância na medicina veterinária por causar diversos prejuízos aos seus hospedeiros, além de existir a suspeita de transmitir Theileria equi para equinos. Poucos são os princípios ativos registrados para o controle do carrapato A. sculptum. O fluazuron é um inibidor de crescimento de insetos utilizado no controle de carrapatos que interfere na produção de quitina do artrópode, impedindo a muda de fase. A resistência de população de carrapatos a agentes antiparasitários representa um obstáculo aos programas de controle. Estudos sobre sistema imunológico de carrapatos buscam avaliar alterações na resposta celular hemolinfática que faça entender a imunologia e fisiologia envolvida nos mecanismos de controle e resistência. O objetivo deste trabalho foi caracterizar quantitativamente e morfologicamente os hemócitos presentes na hemolinfa de fêmeas ingurgitadas do carrapato A. sculptum e avaliar a resposta imune celular deste carrapato após a exposição in vitro ao fluazuron. Para caracterização celular hemolinfática de A. sculptum, a hemolinfa foi coletada através de uma perfuração da cutícula na parte dorsal do carrapato. A hemolinfa foi colocada diretamente em lâmina de vidro para confecção dos esfregaços sanguíneos que foram corados por solução de Giemsa. Foi realizada a contagem diferencial de hemócitos com base na morfologia observada em microscópio óptico em aumento de 1000 vezes, através da identificação das 100 primeiras células encontradas no esfregaço corado. A avaliação dos tamanhos celulares e de seus componentes foi realizada através da leitura das lâminas confeccionadas para contagem diferencial dos hemócitos com o auxílio de um Microscópio óptico Olympus modelo BX51 com luz polarizada, acoplado a uma câmera da mesma marca de modelo UC30. A contagem total de hemócitos foi realizada com auxílio de microscópio óptico e Câmara de Neubauer. Para avaliação da resposta celular após a exposição in vitro ao fluazuron foram realizados testes de imersão com as fêmeas ingurgitadas de A. sculptum nos grupos controle (com apenas os diluentes) e tratados (7,81, 250 e 4000ppm). Foi coletada hemolinfa para contagem total e diferencial de hemócitos nos tempos de 24h e 48h após a imersão. A caracterização celular revelou que o carrapato A. sculptum apresenta média de 1024 céls/L e seis tipos celulares prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos, adipohemócitos e oenocitóides que se distribuem de forma distinta na hemolinfa, onde o granulócito foi o tipo mais frequente. O fluazuron foi capaz de realizar alterações celulares no carrapato A. sculptum promovendo a diminuição dos hemócitos totais na concentração de 4000ppm após 48h, assim como reduzir a frequência de granulócitos e aumentar a frequência de esferulócitos na contagem diferencial.

ABSTRACT

Belonging to the Amblyomma cajennense complex, the tick Ambyomma sculptum can be found in the various regions of Brazil. It is known as star tick or horse tick and parasite domestic, wild and human animals, being the main transmitter of Rickettsia rickettsii etiological agent of Brazilian Spotted Fever. It has great importance in veterinary medicine because of several damages to its hosts, in addition to the suspicion of transmitting Theileria equi to horses. There are few active ingredients registered for the control of the A. sculptum tick. Fluazuron is an insect growth inhibitor used in the control of ticks that interferes with the arthropod's chitin production, preventing the phase change. The resistance of the tick population to antiparasitic agents represents an obstacle to control programs. Studies on the tick's immune system seek to assess changes in the hemolymphatic cellular response that make the immunology and physiology involved in the control and resistance mechanisms understand. The aim of this work was to characterize quantitatively and morphologically the hemocytes present in the hemolymph of engorged females of the A. sculptum tick and to evaluate the cellular immune response of this tick after in vitro exposure to fluazuron. For hemolymphatic cell characterization of A. sculptum. hemolymph was collected through a cuticle perforation in the dorsal part of the tick. The hemolymph was placed directly on a glass slide to make blood smears that were stained with Giemsa's solution. Differential hemocyte counting was performed based on the morphology observed in an optical microscope in 1000-fold magnification, by identifying the first 100 cells found in the stained smear. The evaluation of cell sizes and their components was performed by reading the slides made for differential counting of hemocytes with the aid of an Olympus optical microscope model BX51 with polarized light, coupled to a camera of the same brand model UC30. The total hemocyte count was performed with the aid of an optical microscope and a Neubauer Chamber. To evaluate the cellular response after in vitro exposure to fluazuron, immersion tests were performed with the engorged females of A. sculptum in the control (with diluents only) and treated (7.81, 250 and 4000 ppm) groups. Hemolymph was collected for total and differential hemocyte counts at 24h and 48h after immersion. The cellular characterization revealed that the A. sculptum tick has an average of 1024 cells / L and six cell types prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes, spherulocytes, adipohemocytes and oenocytoids that are distributed differently in the hemolymph, where granulocyte was the most frequent type. Fluazuron was able to make cellular changes in the tick A. sculptum promoting a decrease in total hemocytes at a concentration of 4000ppm after 48h as well as reducing the frequency of granulocytes and increasing the frequency of spherulocytes in the differential count.