Padronização da técnica e infecção in vitro de larvas de Ctenocephalides felis felis por nematoides entomopatogenicos Heterorhabiditis bacteriophora (linhagem HP88) e Heterorhabiditis indica (Linhagem LPP30)

RESUMO

As pulgas da espécie Ctenocefalides felis felis, também conhecidas como pulgas o gato, são ectoparasitas hematófagos da ordem Siphonaptera. Podem parasitar diversas espécies animais, inclusive o homem. Estão amplamdente distribuídas e possuem grande importância em Medicina Veterinária, podendo provocar prurido intenso e dermatite alérgica nos animais de companhia, além de serem transmissoras de diversos patógenos como riquetsias, bactérias, vermes cestódeos, nematódeos e protozoários, tanto em animais quanto em humanos. Seu controle é feito utilizando manejo integrado do ambiente e dos animais infestados através de produtos químicos. Estudos atuais demostram que o uso inadequado de tais produtos químicos para o controle desse inseto tem se tornado item de grande preocupação devido a ocorrência de populações resistentes em algumas regiões. Com isso, a busca por produtos naturais que atuem no controle biológico, como fungos, bactérias, vírus, protozoários e nematoides entomopatogenicos tem se tornado importante no controle de insetos. Nos últimos anos, o estudo sobre os nematoides entomopatogenicos (NEPs) tem aumentado, tornando este, uma alternativa no controle de insetos de importância Médico Veterinária, pois apresentam diversas vantagens em relação ao seu uso, podendo assim ser utilizados isoladamente ou em conjunto com os produtos químicos. O presente estudo teve como objetivo padronizar e avaliar a susceptibilidade de larvas de sete dias de pulgas da espécie Ctenocephalides felis felis por nematoides entomopatogenicos do gênero Heterorhabiditis. O estudo foi dividido em duas etapas, onde, os três primeiros bioensaios tiveram como objetivo padronizar a técnica para infecção de larvas de pulgas de C. felis felis verificando a quantidade de líquido necessária para que os nematoides pudessem se movimentar e infectar as larvas (400, 600 e 1000 µl); avaliar a susceptibilidade de infecção e mortalidade das larvas de pulga por nematoides entomopatogenicos Heterohabiditis bacteriophora (Linhagem HP88) em três concentrações diferentes (120, 160 e 200 NEPs/larva de pulga). O segundo bioensaio teve como objetivo avaliar a susceptibilidade de infecção e mortalidade das larvas de C. felis pelo nematoide entomopatogenico Heterohabiditis indica (Linhagem LPP30) em três concentrações diferentes (120, 160 e 200 NEPs/larva de pulga). Todos os bioensaios foram divididos em dois grupos, um contendo dieta específica para larvas e outro sem dieta. Os dados paramétricos foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) seguida do teste de Tukey (p < 0,05). Nos três primeiros bioensaios utilizando H. bacteriophora (HP88) foi possível padronizar a infecção das larvas de C. felis felis, em placas de petri de 6 cm de diâmetro, onde a concentração de líquido contendo nematoides mais adequada foi de 600µl apresentando diferença significativa quando comparado ao bioenssaio que utilizou 400µl. No bioenssaio em que foi usado o volume de 1000µl a mortalidade foi de 100%, inclusive nos grupos controles, sugerindo que a quantidade de líquido não é adequada para infecção. Ainda para a espécie H. bacteriophora (HP88), no volume de 600µl, não foi observado diferença significativa entre os grupos com dieta e sem dieta e nem na concentração de NEPs utilizadas para a infecção. Na segunda etapa do estudo, foi comprovada a infecção das larvas de C. felis felis por nematoides entomopatogenicos H. indica (LPP30), tanto no grupo com dieta como no grupo sem dieta, assim como nas três concentrações de nematoides entomopatogênicos não havendo diferença significativa entre eles. Através destes resultados pode-se sugerir que é possível realizar a infecção in vitro de larvas de sete dias de pulgas da espécie Ctenocephalides felis felis pelas espécies Heterorhabditis bacteriophora (HP88) e Heterorhabditis indica (LPP30), sendo esta uma ferramenta a ser mais estudada para a utilização no controle biológico destes insetos.

ABSTRACT

Fleas of the species Ctenocefalides felis felis, also known as cat fleas, are hematophagous ectoparasites of the order Siphonaptera. Several animal species can be parasitized, including man. The fleas are widely distributed and are of great importance in Veterinary Medicine, which can cause severe itching and allergic dermatitis in pets, in addition to being vectors of various pathogens such as rickettsiae, bacteria, worm cestodes, nematodes and protozoa, both in animals and in humans. The control is done through integrated management of the environment and animals infested through chemical products. Current studies demonstrate that the inappropriate use of such chemicals to control this insect has become an item of great concern due to the occurrence of resistant populations in some regions. Thus, the search for natural products that act in biological control, such as fungi, bacteria, viruses, protozoa and entomopathogenic nematodes has become important in insect control. In recent years, the study on entomopathogenic nematodes (EPNs) has increased, making this an alternative in the control of insects of veterinary importance, as they present several advantages in relation to their use, and can therefore be used alone or in conjunction with Chemicals. The present study aimed to standardize and evaluate the susceptibility of seven-day-old flea larvae of the species Ctenocephalides felis felis by entomopathogenic nematodes of the genus Heterorhabiditis. The study was divided into two stages, where the first three bioassays aimed to standardize the infection technique of flea larvae of C. felis felis, verifying the amount of liquid necessary for the nematodes to move and infect the larvae (400, 600 and 1000 µl); to evaluate the susceptibility of infection and mortality of flea larvae by entomopathogenic nematodes Heterohabiditis bacteriophora (strain HP88) in three different concentrations (120, 160 and 200 EPNs/flea larvae). The second bioassay aimed to evaluate the susceptibility to infection and mortality of C. felis felis larvae by the entomopathogenic nematode Heterohabiditis indica (strain LPP30) in three different concentrations (120, 160 and 200 EPNs/flea larvae). All bioassays were divided into two groups, one containing a specific diet for larvae and the other without a diet. Parametric data were evaluated by analysis of variance (ANOVA) followed by the Tukey test (p <0.05). In the first three bioassays with H. bacteriophora (HP88), it was possible to standardize the infection of larvae of C. felis felis, in Petri dishes with 6 cm in diameter, where the most adequate concentration of nematodes containing liquid was 600 µl, showing significant difference when compared to the bioassay that used 400 µl. In the bioassay in which the 1000 µl volume was used, mortality was 100%, including in the control groups, suggesting that the amount of liquid is not suitable for infection. Still for the species H. bacteriophora (HP88), in the volume of 600µl, there was no significant difference between the groups with and without diet, nor in the concentration of EPNs used for the infection. In the second stage of the study, infection of the larvae of C. felis felis by entomopathogenic nematodes H. indica (LPP30) was proven, both in the group with diet and in the group without diet, as well as in the three concentrations of entomopathogenic nematodes, with no significant difference between them. Through these results, it can be suggested that in vitro infection of seven-day flea larvae of the species Ctenocephalides felis felis by the species Heterorhabditis bacteriophora (HP88) and Heterorhabditis indica (LPP30) is possible, which is a tool to be studied for the use in the biological control of these insects