EXPRESSÃO GÊNICA EM EXPLANTES DE GLÂNDULA MAMÁRIA DE OVELHAS LACTANTES CULTIVADOS IN VITRO COM ÁCIDOS PALMÍTICO E ESTEÁRICO

RESUMO

BESSANI, D. T. C. EXPRESSÃO GÊNICA EM EXPLANTES DE GLÂNDULA MAMÁRIA DE OVELHAS LACTANTES CULTIVADOS IN VITRO COM ÁCIDOS PALMÍTICO E ESTEÁRICO. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área Produção Animal). Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Lages, 2020. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito dos ácidos palmítico, esteárico e sua combinação na expressão de genes envolvidos na síntese lipídica em explantes de glândula mamária de ovelhas lactantes, cultivados in vitro. Foram utilizados explantes de tecido mamário de 3 ovelhas lactantes com partos gemelares, da raça Lacaune, com 30 (± 4) dias de lactação, produzindo em uma ordenha 1,3 ± 0,8 kg de leite/dia, peso vivo médio de 70,5 ± 9,5 kg e escore de condição corporal 3,0 ± 0,5. O cultivo foi feito em placas de 6 poços em estufa a 37°C com 5% deCO2 e com umidade saturada por 24h. Utilizou-se osseguintestratamentos a) Controle 6 ml de meio de cultivo + albumina sérica bovina (0,1% BSA); b) C16 6 ml de meio de cultivo + 100M de ácido palmítico; c) C18 6 ml de meio de cultivo + 100M de ácido esteárico; d) C16C18 6 ml de meio de cultivo + 100M de ácido palmítico + 100M de ácido esteárico. Após as 24h de cultivo, os explantes foram retirados das placas e realizou-se a extração de RNA, síntese de DNA complementar e análise de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR). Os dados foram analisados pelo software estatístico SAS através do procedimento MIXED, a um nível de 5% de significância e tendência quando entre 5 e 10%. O tratamento C16 aumentou a abundância do RNAm da SCD em 227,4% e reduziu em 50% a abundância do RNAm da AGPAT6 em relação ao Controle. O tratamento C16C18 aumentou a abundância do RNAm da FASN, CD36, FABP4, SCD, GPAT e PPAR- em 71,6, 111,7, 114,1, 218,6, 31,2 e 96,9%, respectivamente, em relação ao Controle. Concluindo, a adição do tratamento C16C18 em explantes de glândula mamária de ovelhas lactante, cultivados in vitro, foi capaz de aumentar a expressão dos genes envolvidos na síntese lipídica.

ABSTRACT

BESSANI, D. T. C. GENE EXPRESSION IN MAMMARY GLAND EXPLANTS OF LACTATING EWES CULTIVATED IN VITRO WITH PALMITIC AND STEARIC ACIDS. Dissertation (Master Degree in Animal Sciences Area Animal Production). University of the State of Santa Catarina. Post-graduate Program in Animal Sciences. Lages, 2020. The objective of this study was to verify the effect of the palmitic and stearic acids, and their combination on the expression of genes involved in the lipid synthesis in mammary gland explants of lactating ewes cultivated in vitro. The mammary tissue explants from 3 lactating Lacaune ewes rearing twins, with 30 (± 4) days of lactation, to produce 1.3 ± 0.8 kg of milk / day, average live weight of 70, 5 ± 9.5 kg and body condition score 3.0 ± 0.5 were cultivated for 24 hours in 6-well plates in an oven at 37 ° C with 5% CO2 and saturated humidity. The treatments were a) Control 6 mL of culture medium + bovine serum albumin (0.1% BSA); b) C16 6 mL of culture medium + 100M of palmitic acid; c) C18 6 mL of culture medium + 100M of stearic acid; d) C16C18 6 mL of culture medium + 100M palmitic acid + 100M stearic acid. After cultivating for 24 hours, the explants were removed from the plates, RNA was extracted, complementary DNA synthesized, and the quantitative real-time PCR analysis (RT-qPCR) performed. The data were analyzed using software SAS through the MIXED procedure at a level of 5% of significance and trend between 5 to 10%. The C16 treatment increased the abundance of SCD RNAm by 227.4% and reduced the abundance of AGPAT6 RNAm by 50% when relation to the control. In addition, the C16C18 treatment increased the abundance of FASN, CD36, FABP4, SCD, GPAT, and PPAR- mRNA by 71.6, 111.7, 114.1, 218.6, 31.2 and 96.9%, respectively, compared to the control treatment. Therefore, the addition of the C16C18 treatment in mammary gland explants of lactating ewes, cultivated in vitro, increased the expression of the genes involved in lipid synthesis.