ESTABLISHMENT AND CHARACTERIZATION OF CANINE PANCREATIC ORGANOIDS

RESUMO

O diabetes mellitus tipo I é uma doença autoimune caracterizada pela destruição das células pancreáticas causando a redução da produção de insulina. É uma disfunção comum que afeta cães de todo o mundo, sendo um grande desafio para Veterinários e tutores em manter o controle adequado da hiperglicemia e, assim, reduzir os sintomas. Foi descrito em ratos e humanos que os organóides pancreáticos podem expressar genes progenitores como LGR5, ALD1A1, NGN3 e SOX9, mesmo em meio de expansão. Além disso, os organóides ductais pancreáticos, em meio de diferenciação adequado, podem gerar células . Estabelecemos os primeiros organóides pancreáticos caninos adultos através do isolamento de células pancreáticas ductais de tecido fresco e congelado originado de cães saudáveis. Para isolar as células pancreáticas ductais foram utilizadas colagenase I + dispase e tripsina. Protocolos de congelamento e descongelamento em diferentes passagens sem perda de capacidade de proliferação e alterações morfológicas foram observados. Na análise de genes alvo usando qPCR mostrando as células do ducto pancreático proliferaram com a expressão de genes progenitores multipotentes.

ABSTRACT

Type I diabetes mellitus is an autoimmune disease characterized by the destruction of pancreatic cells causing the reduction of insulin production. It is a common disfunction that affects dogs from all over the world, being a great challenge for Veterinarians and tutors in maintaining adequate control of hyperglycemia and, thus, reducing symptoms. It was described in mice and humans that pancreatic organoids can express progenitors genes as LGR5, ALD1A1, NGN3 and SOX9, even in expansion medium. Besides, pancreatic ductal organoids, in suitable differentiation medium, can generate cells. We established the first adult canine pancreatic organoids through ductal pancreatic cells isolation from fresh and frozen tissue originating from healthy dogs. To isolate the ductal pancreatic cells collagenase I + dispase and trypsin were used. It was observed that freezing and thawing protocols in different passages without loose proliferation capacity and morphology changes. In the analysis of target genes using qPCR showing the pancreatic duct cells proliferated with the expression of multipotent progenitor genes.