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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221488

Resumo

Enterococcus spp., principalmente E. faecalis e E. faecium, são importantes patógenos de 62 infecções associadas à assistência à saúde (IRAS) devido a sua capacidade de resistir à 63 terapia antimicrobiana. São amplamente distribuídos no ambiente e abundantes na 64 microbiota intestinal de humanos e de outros mamíferos. O leite bovino contaminado por 65 enterococos pode ter implicações na qualidade dos produtos lácteos e na saúde humana. 66 Deste modo, os objetivos deste estudo foram investigar os perfis fenotípicos e genotípicos 67 de resistência aos antimicrobianos e analisar a população clonal de Enterococcus spp. 68 isolados de fezes e leite de bovinos armazenado em latões ou tanques de refrigeração em 69 propriedades leiteiras. Foram coletados 126 swabs retais de vacas leiteiras e 16 amostras 70 de leite de 16 rebanhos do estado do Acre. Até três colônias foram selecionadas por 71 espécime para identificação bacteriana por técnica de espectrometria de massa (MALDI- 72 TOF). O teste de difusão em disco foi realizado para determinar os perfis fenotípicos de 73 resistência aos antimicrobianos. Genes de resistência à vancomicina, macrolídeos, 74 tetraciclina e alto nível de aminoglicosídeos foram investigados entre as amostras 75 resistentes. A população clonal de amostras de E. faecalis e E. faecium foi analisada por 76 eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Cento e sessenta e sete amostras (33,4%) 77 foram identificadas como espécies de Enterococcus, incluindo E. casseliflavus (27,0%), 78 E. gallinarum (17,5%), E. faecalis (13,5%), E. faecium (6,3%), E mundtii (1,4%) e E. 79 durans (1,4%). E. casseliflavus e E. faecalis foram as espécies mais frequentemente 80 isoladas de swab retal e leite, respectivamente. A maior frequência de resistência para E. 81 faecalis foi para ciprofloxacina (47,4%) enquanto para E. faecium foi para penicilina 82 (36,8%). Amostras resistentes à vancomicina não foram detectadas e resistentes à 83 ampicilina e a alto nível de aminoglicosídeos foram raramente. Cepas MDR 84 (multirresistentes) foram recuperadas de swab retal e leite de cinco rebanhos, sendo E. 85 faecium (32%), E. faecalis (2,6%) e E. casseliflavus (1,8%). Apenas os genes de 86 resistência à tetraciclina [tet(L) e tet(K)] foram detectados. Foi observada baixa 87 diversidade clonal tanto para E. faecalis quanto para E. faecium dentro de cada rebanho. 88 No entanto, a população bacteriana era diversa quando considerados os diferentes 89 rebanhos. Não foi observada associação entre perfil de resistência e genótipos de PFGE. 90 Os mesmos genótipos de E. faecalis foram detectadas nos swabs retais e no leite dos 91 animais em vários rebanhos, apontando a necessidade de usar boas práticas de higiene em 92 pequenas propriedades. Embora tenha sido observada baixa frequência de resistência a 93 importantes antimicrobianos prescritos para infecções enterocócicas entre as amostras de 94 origem bovina, programas para controlar a qualidade do leite são essenciais para 95 monitorar o surgimento de resistência aos antimicrobianos entre patógenos de origem 96 alimentar no Brasil.

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Enterococcus spp., mainly E. faecalis and E. faecium, are important pathogens of 107 healthcare-associated infections (HAI) due their ability to resist antimicrobial therapy. 108 They are broadly distributed in environment and abundant in the intestinal microbiota of 109 humans and animals, including cows. Bovine milk contaminated by enterococci may have 110 implications for both dairy product quality and human health. Then, the objectives of this 111 study were survey the phenotypic and genotypic antimicrobial resistance profiles and 112 clonal populations of Enterococcus spp. recovered from bovine feces and milk stored in 113 cans or refrigeration tanks in dairy farms. A total of 126 rectal swabs and 16 milk samples 114 were collected from16 dairy herds in the Acre state. Until three colonies were selected 115 per sample to bacterial identification by MALDI-TOF. Disk diffusion test was performed 116 to determinate the phenotypic antimicrobial resistance profiles. Vancomycin, macrolide, 117 tetracycline, and high-level aminoglycoside resistance genes were investigated among 118 resistant isolates. The clonal population of E. faecalis and E. faecium isolates was 119 analyzed by PFGE. One hundred sixty-seven (33.4%) isolates were identified as 120 Enterococcus species, including E. casseliflavus (27.0%), E. gallinarum (17.5%), E. 121 faecalis (13.5%), E. faecium (6.3%), E. mundtii (1.4%), and E. durans (1.4%). E. 122 casseliflavus and E. faecalis were the species most frequently isolated from rectal swabs 123 and milk samples, respectively. E. faecalis and E. faecium isolates showed the highest 124 resistance frequency to ciprofloxacin (47.4%) and penicillin (36.8%), respectively. 125 Vancomycin-resistant isolates were not detected and ampicillin-, and high-level 126 aminoglycoside-resistant isolates were rarely detected. MDR (multidrug resistant) 127 isolates were recovered from rectal swabs and milk from five dairy farms: E. faecium 128 (32.0%), E. faecalis (2.6%), and E. casseliflavus (1.8%). Only tetracycline resistance 129 genes [tet(L) and tet(K)] were detected among the isolates investigated. Low clonal 130 diversity was observed among the E. faecalis and E. faecium isolates obtained within the 131 investigated herds. However, the bacterial population was diverse between different 132 herds. It was not observed an association between antimicrobial resistance profiles and 133 PFGE genotypes. The same E. faecalis genotypes were detected in rectal swabs and milk 134 in several herds, pointing out the need to use good hygiene practices in small farms. 135 Although low frequency of resistance to important antimicrobial prescribed to 136 enterococcal infections has been observed among isolates from bovine origin, programs 137 to control milk quality are essential to monitor the emergence of antimicrobial resistance 138 among foodborne pathogens in Brazil. 139

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