VITRIFICAÇÃO TESTICULAR DE CÃES PRÉ-PÚBERESVITRIFICAÇÃO TESTICULAR DE CÃES PRÉ-PÚBERES

RESUMO

Uma forma de conservar o material genético de animais pré-púberes é a criopreservação testicular para proteger suas chances de reproduzir e garantir a biodiversidade da espécie ou afastar a ameaça de extinção. A vitrificação de fragmentos testiculares pré-púbere apresenta-se como uma ferramenta primordial para preservação e armazenamento de material genético devido aos seus custos reduzidos, rápida execução e bons resultados. Existem muitos relatos sobre a criopreservação testicular em várias espécies diferentes, entretanto poucos foram os estudos envolvendo cães pré-púberes. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da vitrificação testicular de cães pré-púberes utilizando diferentes associações de crioprotetores. Para tanto foram selecionados 10 cães pré-puberes, que foram submetidos à orquiectomia para obtenção de 10 pares testiculares que foram fragmentados em amostras de aproximadamente 1 a 2 mm3. Esses fragmentos testiculares foram distribuídos da seguinte forma de cada par de testículo foram separados 2 fragmentos para o grupo controle e 2 fragmentos para cada grupo de vitrificação DMSO/EG, DMSO/GLI e EG/GLI. Após pelo menos uma semana de armazenamento em nitrogênio líquido (N2), as amostras foram aquecidas e submetidas à histologia clássica e avaliadas quanto à separação celular da membrana basal (SMB), retração da membrana basal (RMB), distinção entre células de Sertoli e espermatogônias (DSE), visualização nuclear (VN) e condensação nuclear (CN). Em todos os grupos vitrificados houve algum grau de desorganização da arquitetura histológica comparado ao controle. Os túbulos seminíferos apresentaram epitélio germinativo pouco desenvolvido, rico em células germinativas, boa diferenciação entre espermatogônias e celulas de sertoli. Os 3 grupos vitrificados apresentaram maior SMB em relação ao controle (P < 0,05) e não diferiram entre si. Todos os grupos foram semelhantes ao controle quanto à RMB e VN. Quanto à DSE, a associação DMSO/EG não diferiu do controle, nem da associação EG/GLI, no entanto, essa associação e a associação DMSO/GLI foram significativamente inferiores ao controle, sendo essa última o pior resultado (P < 0.05). Com relação à CN, EGLI não diferiu do controle, nem tampouco do DMSO/EG que, por sua vez foi inferior ao controle (P < 0,05) e similar ao DMSO/GLI. Conclui-se que as associações DMSO/EG e EG/GLI foram as que melhor preservaram a integridade testicular após o processo de vitrificação testicular de cães pré-púberes.

ABSTRACT

One way to conserve the genetic material of prepubertal animals is testicular cryopreservation to protect their chances of reproducing and guarantee the species' biodiversity or avert the threat of extinction. The vitrification of prepubertal testicular fragments presents itself as a primordial tool for the preservation and storage of genetic material due to its reduced costs, fast execution and good results. There are many reports of testicular cryopreservation in several different species, however few studies have been carried out involving prepubertal dogs. Thus, the objective of this work was to evaluate the effect of testicular vitrification in prepubertal dogs using different cryoprotectant associations. For this purpose, 10 testicles from prepubertal dogs were used, which were fragmented into samples of 1 to 2 mm3 and vitrified in different cryoprotectant associations dimethylsulfoxide (DMSO)/ethylene glycol (EG), EG/glycerol(GLY) and DMSO/GLY. After a period of storage, the samples were warmed and subjected to classical histology and evaluated for cell separation of the basement membrane (SBM), basement membrane retraction (BMR), distinction between Sertoli cells and spermatogonia (DSS), nuclear visualization (NV) and nuclear condensation (NC). In all vitrified groups there was some degree of disorganization of the histological architecture compared to the control. The seminiferous tubules showed poorly developed germinal epithelium, rich in germ cells, good differentiation between spermatogonia and sertoli cells. The 3 vitrified groups had higher SBM compared to the control (P < 0.05) and did not differ from each other. All groups were similar to the control regarding BMR and NV. As for DSS, the DMSO/EG association did not differ from the control or from the EG/GLY association, however, this association and the DMSO/GLY association were significantly lower than the control, the latter being the worst result (P < 0.05). Regarding NC, EG/GLY did not differ from the control, nor from the DMSO/EG which, in turn, was inferior to the control (P < 0.05) and similar to the DMSO/GLY. It is concluded that the DMSO/EG and EG/GLI associations were the ones that best preserved testicular integrity after the testicular vitrification process in prepubertal dogs.