CARACTERIZAÇÃO DO USO DE LINHAGENS CELULARES DE IXODÍDEOS COMO MODELO DE ESTUDO IN VITRO DA INTERAÇÃO ENTRE CARRAPATO e LEISHMANIA SPP

RESUMO

A leishmaniose é um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania que afetam homens e animais. A leishmaniose canina é uma doença de grande importância na saúde pública, pois os cães são o principal reservatório do parasito. A maioria dos cães infectados vem de áreas pobres, onde há ectoparasitos, como o carrapato Rhipicephalus sanguineus. Sua presença levantou a hipótese de que este poderia ser um vetor do parasito. O objetivo deste trabalho foi propor um modelo in vitro de estudo da interação entre Leishmania spp. e carrapatos Ixodídeos, usando a linhagemcelular do carrapato Ixodes scapularis (IDE8). Para esta análise, células IDE8 foram incubadas com promastigotas de L. amazonensis ou L. infantum durante 2, 24 e 48 h a 34 ° C. Resultados mostraram que as formas promastigotas se ligam, interagem com a membrana das células de carrapato, são endocitadas e permanecem dentro de um vacúolo justaposto, como mostrado por microscopia eletrônica de transmissão e varredura. O índice de associação entre IDE8 e L. amazonensis não se alterou, mas entre IDE8 e L.infantum aumentou em cerca de 7 vezes em 48h. Os ensaios de viabilidade através da atividade de LDH mostraram que as células permanecem viáveis durante incubação com os parasitas. Além disso, L. infantum apresentou uma sobrevivência 13 vezes maior do que L. amazonenses após a interação com IDE8 em 48h. As células IDE8 apresentaram aumento de 2 vezes na produção de ROS e de 8 vezes da produção de oxiesterol após a interação com L. infantum. Os lipídeos triacilglicerol, 1,2 e 1,3 diacilgliceróis, monoacilglicerol e colesterol esterificado, todos derivados dos ácidos graxos, também apresentaram aumento após a interação. Assim, nossos dados indicam a capacidade de Leishmania spp. Interagir com células de carrapato in vitro, sobreviver a essa interação e modular reações metabólicas na célula hospedeira.

ABSTRACT

Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania that affect humans and animals. Canine leishmaniasis is a disease of great public health importance, since dogs are the main reservoir of the parasite. Most infected dogs come from poor areas where there are ectoparasites, such as the Rhipicephalus sanguineus tick. Its presence raised the hypothesis that this could be a vector of the parasite. The aim of this work was to propose an in vitro model to study the interaction between Leishmania spp. and Ixodid ticks, using the cell line from the Ixodes scapularis tick (IDE8). For this analysis, IDE8 tick cells were incubated with L. amazonensis or L. infantum promastigotes during 2, 24 and 48 h at 34 ° C. The results showed that promastigotes bind, interact with the tick cell membrane, are endocytosed, and remain within a juxtaposed vacuole, as shown by transmission and scanning electron microscopy. The association index between IDE8 and L. amazonensis did not change, but between IDE8 and L. infantum it increased approximately 7 times up to 48 h. Viability assay through LDH activity demonstrated that IDE8 tick cell remain viable during infection with parasites. Furthermore, L. infantum showed a survival 13 times higher than L. amazonensis after interaction with IDE8. IDE8 tick cells infected with L. infantum also showed a 2-fold increase in ROS production and an 8-fold increase in oxysterol production. The lipids triacylglycerol, 1,2 and 1,3 diacylglycerols, monoacylglycerol and esterified cholesterol, derived from fatty acids, also showed an increase after the interaction. Therefore, our data indicate that Leishmania spp. are able to interact with tick cells in vitro, survive, and modulate metabolic reactions in tick cells.