PESQUISA DE Escherichia coli DIARREIOGÊNICA EM ÁGUA DE MÚLTIPLOS USOS COMO MODELO DE VIGILÂNCIA EM SAÚDE ÚNICA

RESUMO

A Bacia Hidrográfica do Rio Mearim se destaca por sua importância social, econômica, ambiental, energética e cultural, sobretudo, para pequenos produtores rurais que utilizam essa fonte de água em atividades agroprodutivas e para pescadores artesanais que retiram desse recurso hídrico seu alimento e sustento. Nesse sentido, objetivou-se pesquisar Escherichia coli diarreiogênica em água de múltiplos usos como modelo de vigilância em saúde única. Para a realização do estudo coletou-se amostras de água em cinco pontos previamente selecionados para os municípios de Arari e Vitória do Mearim, estado do Maranhão, o que correspondeu a uma área do baixo curso do rio Mearim. De cada ponto foram coletadas amostras em triplicata, totalizando 30 amostras, sendo 15 amostras por município. As amostras foram coletadas em frascos estéreis de vidro borosilicato, com capacidade de 500 mL, de maneira asséptica e acondicionadas ao abrigo de luz solar em caixas isotérmicas com gelo reciclável. Para a quantificação de coliformes totais e E. coli utilizou-se o sistema cromogênico enzimático (Colilert, Idexx, USA) e das amostras positivas nesse teste procedeu-se ao isolamento e confirmação da bactéria em estudo por meio de metodologia convencional (enriquecimento das amostras e identificação bioquímica das colônias isoladas). A extração do DNA das culturas puras de E. coli foi realizada por aquecimento seguido da caracterização por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando o Kit GoTaq® Colorless Master Mix (Promega®) de acordo com as recomendações do fabricante. Das amostras analisadas, 100% (n=30) apresentaram coliformes totais com populações bacterianas que variaram de 7.701 a 24.196 NMP/100 mL para o município de Arari e 3.524 a 24.196 NMP/100 mL para Vitória do Mearim. Em seis pontos amostrados, sendo um ponto no município de Arari (P3) e todos os pontos em Vitória do Mearim (P1 a P5), totalizando 60% (n= 18) das amostras analisadas, podese constatar valores médios de E. coli acima do limite máximo estabelecido na legislação ambiental brasileira. Dos 10 pontos amostrados, foram isoladas de cada amostra dois morfotipos bacterianos diferentes caracterizados por colônias róseas e colônias incolores/transparentes. Os morfotipos bacterianos diferentes foram transferidos para testes bioquímicos em que foi possível constatar as características bioquímicas de 20 isolados compatíveis com a bactéria E. coli. Destes, foram detectados genes de virulência característicos de E. coli enterotoxigênica (ETEC) e E. coli enteropatogênica típica (EPEC-t) e atípica (EPECa). Os genes Stx1 e Stx2 não foram identificados no período de execução do estudo. Conclui-se que a qualidade microbiológica da água no trecho do baixo curso do rio Mearim pertencente a Bacia Hidrográfica do Rio Mearim sofre deterioração caracterizada por elevadas concentrações de coliformes totais, E. coli e diversificados patótipos diarreiogênicos (ETEC, EPEC-t e EPECa). A confirmação desse grupo de micro-organismos patogênicos representa risco epidemiológico, comprometendo diversos usos desse recurso hídrico, como a irrigação de frutas e hortaliças ingeridas cruas, pesca, dessedentação animal e recreação. Investimentos estruturais em saneamento básico são fundamentais para minimizar a degradação ambiental resultante das atividades antrópicas e para atuar preventivamente na saúde única. Adicionalmente, a recuperação das matas ciliares ao longo da bacia hidrográfica e manutenção da vegetação nestas áreas são medidas efetivas na redução do transporte de partículas do solo para os cursos dágua, e em consequência, acarreta a melhoria das características qualiquantitativas da água.

ABSTRACT

The Mearim River Basin stands out for its social, economic, environmental, energetic and cultural importance, especially for small rural producers who use this water source in agroproductive activities and for artisanal fishermen who withdraw their food and sustenance from this water resource. In this sense, the objective was to research diarrheagenic Escherichia coli in water of multiple uses as a model of single health surveillance. To carry out the study, water samples were collected at five points previously selected for the municipalities of Arari and Vitória do Mearim, state of Maranhão, which corresponded to an area of the lower course of the Mearim River. Samples were collected in triplicate from each point, totaling 30 samples, 15 samples per municipality. The samples were collected in sterile borosilicate glass bottles, with a capacity of 500 mL, in an aseptic manner and stored under sunlight in isothermal boxes with recyclable ice. For the quantification of total coliforms and E. coli, the enzymatic chromogenic system (Colilert, Idexx, USA) was used and the positive samples in this test proceeded to isolate and confirm the bacterium under study by means of conventional methodology (enrichment of the samples and biochemical identification of isolated colonies). DNA extraction from pure E. coli cultures was performed by heating followed by characterization using polymerase chain reaction (PCR) using the GoTaq® Colorless Master Mix Kit (Promega®) according to the manufacturer's recommendations. Of the analyzed samples, 100% (n = 30) had total coliforms with bacterial populations that varied from 7,701 to 24,196 NMP/100 mL for the municipality of Arari and 3,524 to 24,196 NMP/100 mL for Vitória do Mearim. In six sampled points, one point in the municipality of Arari (P3) and all points in Vitória do Mearim (P1 to P5), totaling 60% (n = 18) of the analyzed samples, one can verify average values of E. coli above the maximum limit established in Brazilian environmental legislation. Of the 10 sampled points, two different bacterial morphotypes were isolated from each sample, characterized by pink and colorless / transparent colonies. The different bacterial morphotypes were transferred to biochemical tests in which it was possible to verify the biochemical characteristics of 20 isolates compatible with the E. coli bacterium. Of these, virulence genes characteristic of E. coli enterotoxigenic (ETEC) and typical E. coli enteropathogenic (EPEC-t) and atypical (EPEC-a) were detected. The Stx1 and Stx2 genes were not identified at the time of the study. It is concluded that the microbiological quality of the water in the stretch of the low course of the Mearim River belonging to the Mearim River Basin suffers deterioration characterized by high concentrations of total coliforms, E. coli and diverse diarrhogenic genotypes (ETEC, EPEC-t and EPEC- The). The confirmation of this group of pathogenic microorganisms represents an epidemiological risk, compromising several uses of this water resource, such as irrigation of raw ingested fruits and vegetables, fishing, animal drinking and recreation. Structural investments in basic sanitation are fundamental to minimize the environmental degradation resulting from human activities and to act preventively in unique health. Additionally, the recovery of riparian forests along the hydrographic basin and the maintenance of vegetation in these areas are effective measures in reducing the transport of soil particles to water courses, and consequently, lead to the improvement of the qualitative and quantitative characteristics of the water