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Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-222138

Resumo

A produção de embriões suínos in vitro (PIVE) possui limitações para melhores resultados em biotecnologias reprodutivas. Dentre os fatores prejudiciais na PIVE, o alto teor lipídico em oócitos e embriões, a composição insuficiente do meio e a consequente produção de espécies reativas de oxigênio (EROS) são as mais proeminentes. O 1º artigo desta dissertação revisa sobre metabolizadores incluídos no sistema de PIVE, a fim de sustentar a maturação nuclear e citoplasmática, bem como a melhoria do consumo de gotículas lipídicas (GL). O 2º artigo relata um estudo onde 50M DHA foi adicionado durante o período de maturação, com e sem suplementação de fluído folicular suíno (FFp). Os resultados demonstraram que DHA sem FFp prejudica a maturação e o desenvolvimento embrionário. Além disso, não houve redução do conteúdo lipídico em oócitos tratados com DHA, o que pode estar relacionado a distúrbios metabólicos no complexo cumulus-oócito (CCO). Durante a maturação, oócitos suínos preferem glicose como substrato para consumo de energia. O etosulfato de fenazina (PES) é um receptor de elétrons capaz de converter NADPH em NADP, induzindo a utilização de glicose através da via de pentose fosfato (PPP), influenciando o metabolismo lipídico. Forskolin (FSK) é outro modulador químico que estimula a lipólise através da ativação do AMPc, podendo também sincronizar a maturação citoplasmática e nuclear de oócitos. No último artigo, duas concentrações de PES (0,5M e 0,05M) e uma de FSK (10M) foram utilizadas durante todo o período de maturação in vitro, para dois experimentos diferentes. No Experimento 1, a maturação oócitária e o conteúdo lipídico foram avaliados; o desenvolvimento embrionário, a contagem de células embrionárias e o conteúdo lipídico de blastocistos no dia 7 foram avaliados no Experimento 2. A concentração de 0,5M de PES teve um impacto negativo na maioria dos parâmetros avaliados, enquanto a menor dose de PES foi semelhante ao controle negativo (CN) e ao controle de FSK em ambos os dados do Experimento 1, obtendo também taxas menores de clivagem quando comparada ao CN no Experimento 2. Em conjunto, nossos resultados demonstraram comprometimento do desenvolvimento embrionário devido à possível desarmonia na maturação oócito e transtorno do metabolismo causada pela adição de DHA ou PES. Além disso, FSK não melhorou as taxas de maturação ou reduziu o conteúdo lipídico.

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Swine in vitro embryo production (IVP) has limitations for better outcomes in reproductive biotechnologies. Among factors impairing IVP, high lipid content in both oocytes and embryos, insufficient media composition and consequent reactive oxygen species (ROS) production are the most prominent. The 1st paper of this dissertation contains a review regarding metabolizers included into the IVP system in order to sustain nuclear and cytoplasmic maturation, as well as improvement of lipid droplet (LD) consumption. The 2nd paper reports a study where 50M DHA was added during the maturation period, with and without porcine follicular fluid (pFF) supplementation. The results demonstrated that DHA without pFF impairs maturation and embryo development. Also, there was no reduction of the lipid content in oocytes treated with DHA, a finding that might be related to metabolic disorders in the cumulus-oocyte complexes (COC). During maturation period, porcine oocytes prefer glucose as substrate for energy consumption. Phenazine Ethosulfate (PES) is an electron receptor that converts NADPH to NADP, inducing glucose utilization through the pentose phosphate pathway (PPP), influencing lipid droplets (LD) metabolism. Forskolin (FSK) is another chemical modulator that stimulates lipolysis through cAMP activation, being also able to synchronize cytoplasmic and nuclear maturation of oocytes. In the 3rd paper, two concentrations of PES (0.5M and 0.05M) and one of FSK (10 M) were used during the entire in vitro maturation period, for two different experiments. In Experiment 1, oocyte maturation and lipid content were evaluated; and embryo development, embryo cell count and lipid content of blastocysts on day 7 were evaluated in Experiment 2. The concentration of 0.5M of PES had a negative impact on most of the evaluated parameters, while the lowest PES dose was similar to the negative control (NC) and FSK control in both data of Experiment 1, but also had lower cleavage rates when compared to NC in Experiment 2. Taken together, our results demonstrated impairment of embryo development due to possible disharmony on oocyte maturation and metabolism disorder caused by either addition of DHA or PES. Also, FSK did not improve maturation rates or reduced lipid content.

Biblioteca responsável: BR68.1