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Avaliação da eficiência de toxóide recombinante contra botulismo em bubalinos

DENIS YUKIO OTAKA.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-222158

Resumo

criação de búfalos (Bubalus bubalis) no Brasil se consolida cada vez mais como importante fonte econômica alternativa a bovinocultura por suas características de rusticidade e adaptabilidade. O estado do Pará destaca-se por concentrar o maior rebanho bubalino brasileiro com um efetivo aproximado de 519 mil animais. O botulismo em bovídeos é uma doença de grande importância econômica e sanitária, sendo uma das principais causas de mortalidade de animais adultos no Brasil. A vacinação com os toxoides C e D de Clostridium botulinum é a forma mais efetiva de controle desta doença, contudo, apesar da eficiência, os toxoides botulínicos comerciais apresentam limitações no que diz respeito a sua produção industrial: i- C. botulinum produz baixos níveis de neurotoxina botulínica (BoNT) in vitro; ii- a produção em larga escala é laboriosa, onerosa e sua produtividade dificilmente previsível e; iii- a produção industrial exige a adoção de normas muito exigentes de biossegurança. Dentro dessa ótica as vacinas utilizando proteínas recombinantes vêm apresentando resultados promissores como ferramenta alternativa na imunização animal. Diante da importância da doença e das dificuldades na produção da vacina comercial este projeto teve como objetivo avaliar a eficiência de um toxóide recombinante contra botulismo em bubalinos estabelecendo a curva de anticorpos neutralizantes. Cinquenta búfalos adultos sem histórico de vacinação contra botulismo e níveis detectáveis de anticorpos contra BoNTs C e D foram agrupados aleatoriamente em cinco grupos de dez animais: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os bubalinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações da proteína recombinante 100µg, 200µg e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 receberam solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses, num volume por dose de 5ml, por via subcutânea, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. Foram realizadas coletas de amostras sangue nos dias 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 365. As amostras foram centrifugadas e os soros submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. No teste de potência aos 56 dias após a vacinação a formulação recombinante com concentração 400µg foi aquela que conseguiu induzir resposta imune humoral com os maiores títulos. No teste de eficiência (longevidade vacinal) a formulação de 200µg do ponto de vista custo/benefício, foi a mais eficiente para a produção em grande escala e, portanto, a formulação a ser escolhida.
Buffalo (Bubalus bubalis) rearing in Brazil is increasingly consolidating itself as an important alternative economic source to cattle raising due to its characteristics of rusticity and adaptability. The state of Pará stands out for concentrating the largest Brazilian buffalo herd with an approximate herd of 519 thousand animals. Botulism in cattle is a disease of great economic and sanitary importance, being one of the main causes of mortality of adult animals in Brazil. Vaccination with Clostridium botulinum toxoids C and D is the most effective way to control this disease, however, despite their efficiency, commercial botulinum toxoids have limitations in their industrial production: i-C. botulinum produces low levels. botulinum neurotoxin (BoNT) in vitro; (ii) large-scale production is laborious, costly and its productivity hardly predictable; iii- Industrial production requires the adoption of very demanding biosafety standards. From this perspective, vaccines using recombinant proteins have shown promising results as an alternative tool in animal immunization. Given the importance of the disease and the difficulties in commercial vaccine production, this project aimed to evaluate the efficiency of a recombinant toxoid against botulism in buffaloes by establishing the neutralizing antibody curve. Fifty adult buffaloes with no history of botulism vaccination and detectable levels of BoNTs C and D antibodies were randomly grouped into five groups of ten animals: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 buffaloes were vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of the 100µg, 200µg and 400µg recombinant protein, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (0.9% NaCl). All animals received two doses, in a volume per dose of 5 ml, subcutaneously, on the neck table, on days zero and 28 after the first dose. Blood samples were collected on days 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 365. The samples were centrifuged and serum were submitted to seroneutralization technique in mice. In the potency test at 56 days after vaccination, the recombinant formulation with concentration 400µg was the one that was able to induce humoral immune response with the highest titers. In the efficiency test (vaccine longevity) the 200µg formulation from the cost / benefit point of view was the most efficient for large scale production and therefore the formulation to be chosen.
Biblioteca responsável: BR68.1