TOXICIDADE DOS ÓLEOS ESSENCIAIS DE Illicium verum, Cymbopogon citratus E Azadirachta indica SOBRE Rhipicephalus microplus EM TESTE In vitro

RESUMO

No Brasil, o controle de Rhipicephalus microplus é realizado principalmente por acaricidas químicos. Todavia, devido ao crescente número de populações resistentes aos princípios ativos disponíveis no mercado e também devido à preocupação com a qualidade dos produtos de origem animal, novas tecnologias vêm sendo pesquisadas. Uma alternativa que tem demonstrado potencial é a utilização de óleos essenciais, porém, ainda são escassos os estudos a respeito do mecanismo de ação desses óleos nos carrapatos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito citotóxico e acaricida de diferentes concentrações dos óleos essenciais das plantas Illicium verum (anis estrelado), Cymbopogon citratus (capim cidreira) e Azadirachta indica (neem), sobre hemócitos e larvas de R. microplus. Para o teste de toxicidade, os óleos essenciais (obtidos comercialmente) foram diluídos em solução de água destilada e Tween 80® a 3% e as concentrações utilizadas foram 1,25; 2,5; 5; 10,0 e 20,0 mg/mL. Para obtenção dos hemócitos foi realizada a coleta de hemolinfa de 400 fêmeas completamente ingurgitadas de R. microplus. Os hemócitos foram plaqueados na concentração de 5 × 104 células em cada poço de uma placa de 96 poços, expostos a 10L da solução de cada óleo. Doze horas após a exposição, 20 L de resazurina na concentração de 0,13 mg/mL foram adicionados em cada poço e as amostras incubadas no escuro por três horas. A intensidade de fluorescência foi avaliada através de um fluorímetro de placa. A viabilidade relativa dos hemócitos foi calculada considerando as células não expostas a nenhum óleo como controles (100% viabilidade). Para avaliar a ação acaricida, foi realizado o teste de pacote de larvas, onde aproximadamente 100 larvas foram expostas às diferentes concentrações dos óleos e o percentual de mortalidade das larvas foi avaliado após 24 horas. Como resultados, verificou-se que na exposição a 20mg/mL dos óleos houve a maior alteração no percentual de viabilidade celular, cujas reduções foram de 23%, 15% e 9,4% para anis estrelado, capim cidreira e neem, respectivamente. No bioensaio com larvas de R. microplus, anis estrelado e capim cidreira causaram 99,3% e 63,2% de mortalidade, respectivamente, na concentração de 20mg/mL, enquanto que o neem não causou mais que 1,0% de mortalidade das larvas em nenhuma das concentrações testadas. Assim, conclui-se que os óleos essenciais de anis estrelado e capim cidreira apresentaram toxicidade sobre hemócitos e ação acaricida para R. microplus, sendo o anis estrelado o mais citotóxico e letal entre eles.

ABSTRACT

In Brazil, the control of Rhipicephalus microplus is carried out mainly by chemical acaricides. However, due to the growing number of populations resistant to the active ingredients available on the market and also due to the concern with the quality of products of animal origin, new technologies are being researched. An alternative that has demonstrated potential is the use of essential oils, however, studies on the mechanism of action of these oils in ticks are still scarce. Thus, the aim of this study was to evaluate the cytotoxic and acaricidal effect essential oils from the plants Illicium verum (star anise), Cymbopogon citratus (lemongrass) and Azadirachta indica (neem), in different concentrations against R. microplus. For the toxicity test, the essential oils (obtained commercially) were diluted in a solution of distilled water and 3% Tween 80® and the concentrations used were 1.25; 2.5; 5; 10.0 and 20.0 mg ml-1. Harvesting hemolytic, hemolymph was collected from 400 females completely engorged of R. microplus. Hemocytes were plated at a concentration of 5 × 104 cells in each well of a 96-well plate, exposed to 10L of the solution of each oil. Twelve hours after exposure, 20 L of resazurin at a concentration of 0.13 mg / mL was added to each well and the samples incubated in the dark for three hours. The fluorescence intensity was assessed using a plate fluorimeter. The relative viability of the hemocytes was calculated considering the cells not exposed to any oil as controls (100% viability). In order to evaluate the acaricidal action, the larval pack test was performed, where approximately 100 larvae were exposed to different oil concentrations and the mortality percentage of the larvae was assessed after 24 hours. As a result, it was found that in the exposure to (20mg mL-1) of oils there was the greatest change in the percentage of cell viability, whose reductions were of 23%, 15% and 9.4% for star anise, lemongrass and neem, respectively. In the bioassay with R. microplus larvae, star anise and lemongrass caused 99.3% and 63.2% of mortality, respectively, at a concentration of 20mg mL-1, while the neem caused no more than 1.0% mortality larvae in none of the tested concentrations. Thus, it is concluded that the essential oils of star anise and lemongrass showed toxicity on hemocytes and acaricidal action for R. microplus, with star anise being the most cytotoxic and lethal among them.