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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-222322

Resumo

Prochilodus brevis é um importante peixe reofílico, cuja sobrevivência tem sido ameaçada por ações antrópicas, sendo necessário desenvolver biotecnologias para sua conservação, como a vitrificação seminal. Portanto, o estudo objetivou elaborar um protocolo de vitrificação para o sêmen de P. brevis, definindo o melhor diluente, a concentração de crioprotetor, o volume de armazenamento da amostra vitrificada e a suplementação do diluidor com polissacarídeos sulfatados (PS) extraídos da pele de O. niloticus. Foram realizados dois Experimentos de vitrificação seminal. O Experimento 1 foi dividido em duas etapas, que consistiram em avaliar dois crioprotetores (DMSO ou Etilenoglicol-EG) e sua associação (DMSO+EG) em diferentes concentrações (10%, 20% e 30%), bem como sua interação com dois diluentes [Glicose 5% - etapa 1; e Água de Coco em Pó (ACP-104) etapa 2]. No Experimento 2, avaliou-se a influência do diluente (Glicose 5% ou ACP-104), do volume armazenado (60 L e 420 L) e da suplementação do meio criodiluidor com 0,5 mg.mL-1 de PS. Em ambos os experimentos, o sêmen coletado foi diluído, vitrificado pelo método de gotas e armazenado em criotubos no nitrogênio líquido. Após 15 dias, as amostras foram descongeladas, centrifugadas, ressuspensas e avaliadas quanto à cinética, morfologia e integridade de membrana plasmática (IMP) e de DNA espermáticos (IDE). No Experimento 1, não houve interação (P>0,05) entre crioprotetores e suas concentrações para os parâmetros cinéticos e de morfologia. Contudo, ocorreu interação (P<0,05) para os demais parâmetros: a IMP foi superior quando se utilizou Glicose 5%+EG 10% e ACP-104+EG 30%; já a IDE foi superior com EG 30% para ambos os diluentes. No experimento 2, ACP-104 mostrou-se superior (P<0,05) à Glicose 5%. A suplementação com PS melhorou (P<0,05) as taxas de IMP e IDE, que foram superiores (P<0,05) quando a amostra foi armazenada em menor e em maior volume, respectivamente. Houve interação (P<0,05) entre diluente e volume armazenado, sendo ACP-104 superior à Glicose 5% para motilidade em ambos os volumes, e para Velocidade média do percurso (VAP) e IMP no volume maior. Glicose 5% teve VAP e integridade de membrana superiores quando armazenada em menor volume. Houve interação tripla (P<0,05) para IDE, que foi superior com ACP-104 e armazenado em maior volume, independente da suplementação. Conclui-se que ACP-104, associado a EG 30%, suplementado com 0,5 mg.mL-1 de PS e armazenado em maior volume compõem o melhor tratamento para a vitrificação espermática de P. brevis.

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Prochilodus brevis is an important rheophilic fish, whose survival has been threatened by human actions, and it is necessary to develop biotechnologies for its conservation, such as sperm vitrification. Therefore, the study aimed to develop a vitrification protocol for P. brevis semen, defining the best diluent, cryoprotectant concentration, storage volume of the vitrified sample and supplementation of the thinner with sulfated polysaccharides (SP) extracted from the skin of O. niloticus. Two sperm vitrification experiments were carried out. Experiment 1 was divided into two steps, which consisted of evaluating two cryoprotectants (DMSO or Ethylene glycol-EG) and their association (DMSO+EG) at different concentrations (10%, 20% and 30%), as well as their interaction with two diluents [Glucose 5% - step 1; and Powder Coconut Water (ACP-104) - step 2]. In Experiment 2, the influence of the diluent (Glucose 5% and ACP-104), the stored volume (60 L and 420 L) and the supplementation of the cryodiluent medium with 0.5 mg.mL-1 of PS are evaluated. In both experiments, the collected semen was diluted, vitrified by the droplet method and stored in cryotubes in liquid nitrogen. After 15 days, the samples were thawed, centrifuged, resuspended and evaluated for kinetics, morphology and plasma membrane integrity (PMI) and spermatic DNA integrity (SDI). In experiment 1, there was no interaction (P>0.05) between cryoprotectants and their concentrations for kinetic and morphology parameters. However, interaction occurred (P<0.05) for the other parameters: PMI was higher when Glucose 5%+EG 10% and ACP-104+EG 30% were used; the SDI was higher with 30% EG for both diluents. In experiment 2, ACP-104 was higher (P<0.05) than Glucose 5%. SP supplementation improved (P<0.05) at PMI and SDI rates, which were higher (P<0.05) when the sample was stored lower and in higher volume, respectively. There was interaction (P<0.05) between diluent and stored volume, with ACP-104 higher than Glucose 5% for motility in both volumes, and for average path velocity (VAP) and PMI at higher volume. Glucose 5% had higher VAP and PMI when stored in lower volume. There was triple interaction (P<0.05) for SDI, which was higher with ACP-104 and stored in higher volume, regardless of supplementation. It was concluded that ACP-104, associated with 30% EG, supplemented with 0.5 mg. mL-1 SP and stored in larger volume make up the best treatment for the sperm vitrification of P. brevis.

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