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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-222355

Resumo

Os carrapatos são vetores de doenças com grande importância para saúde humana e veterinária. Os carrapatos do grupo Rhipicephalus sanguineus senso lato (s. l.), conhecidos como carrapato comum do cão, estão sob investigação que visa determinar sua posição taxonômica, e mais recentemente através de técnicas moleculares foi determinado que existem duas linhagens com diferenças significativas, entre elas o clima em que vivem, temperado ou tropical. A Erliquiose Monocítica Canina (EMC) é uma rickettsiose transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus da linhagem tropical, causada pelo agente intramonocítico Ehrlichia canis e possui grande importância para a saúde dos cães e um recente caráter zoonótico ainda em investigação, sendo diagnosticada corriqueiramente em estabelecimentos veterinários. O presente estudo se trata de uma investigação epidemiológica, utilizando a técnica de PCR em tempo real (qPCR) para a detecção do agente em questão em amostras de órgãos de carrapatos coletados em diferentes altitudes no sudeste do Estado do Rio de Janeiro. Foram realizadas saídas mensais aos municípios de Paracambi, Barra do Piraí, Petrópolis e Teresópolis, visitando residências aleatórias nas áreas urbana e rural de cada município e selecionados proprietários de cães pela vontade de participar do estudo, que responderam um questionário epidemiológico contendo informações sobre os animais e o ambiente na ocasião. Os carrapatos foram procurados durante 15 minutos nos animais e 15 minutos no ambiente, acondicionados em tubos de ensaio tampados com algodão, identificados e dissecados no dia seguinte. Os órgãos de cada carrapato foram acondicionados separadamente em conservante RNAlater® em microtubos de 1,5 ml à -20 °C até a extração do material genético. Ao todo foram coletados 412 carrapatos, dentre os quais 86 fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus que foram dissecadas. A detecção do agente através da qPCR revelou positividade de 15 entre 86 carrapatos dissecados (17,71%), e dentre os órgãos, 15 entre 86 amostras de intestino e glândula salivar foram consideradas positivas (17,71%), enquanto apenas 10 entre 86 amostras de ovários foram consideradas positivas (11,62%). Variáveis intrínsecas aos animais não apresentaram influência na infecção de seus carrapatos por E. canis. Os carrapatos na estação seca apresentaram 3,97 vezes mais chance de estarem infectados por E. canis que na estação chuvosa (IC: 0,89 17,71, p < 0,05). Carrapatos coletados em altitudes superiores a 650 m apresentaram 2,86 vezes mais chances de estarem infectados por E. canis que carrapatos coletados em altitudes abaixo de 650 m (IC: 0,9 9,15, p = 0,05). A linhagem dos carrapatos envolvidos na transmissão de E. canis nas condições do presente estudo foi constatada como tropical através de digestão por enzimas de restrição de um produto amplificado do DNA mitocondrial que transcreve para a subunidade 16S do RNA ribossomal (16S rRNA).

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Ticks are vectors of diseases of great importance for human and veterinary health. The ticks of the group Rhipicephalus sanguineus sense lato (s.l.), known as "common dog tick", are under investigation for their exact taxonomic position, and more recently using molecular techniques it was determined that there are two different lineages, in which they are addapted to the climate in which they live, temperate or tropical. Monocytic Canine Ehrlichiosis (EMC) is a disease transmitted by ticks Rhipicephalus sanguineus of tropical lineage, caused by the intramonocytic agent Ehrlichia canis and has great importance for the health of dogs and a new zoonotic profile still under investigation, being diagnosed very often in veterinary establishmensts. The present study deals with an epidemiological investigation, using a realtime PCR technique (qPCR) to detect the agent in question in tests of tick organs collected at different altitudes in the State of Rio de Janeiro. Monthly surveys were made to the municipalities of Paracambi, Barra do Piraí, Petrópolis and Teresópolis, visiting random residences in the urban and rural areas of each municipality and selected for dogs, after being allowed to participate in studies, who answered an epidemiological questionnaire using information about animals and the environment at the time. Ticks were searched for 15 minutes in animals and 15 minutes in the environment, conditioned in test tubes capped with cotton, identified and dissected the next day. The organs of each tick were stored in preservative RNAlater® in 1.5 ml microtubes at -20 ° C until the extraction of the genetic material. In all, 412 ticks were collected, among which 86 engorged females of R. sanguineus that were dissected. Detection of the agent using qPCR revealed a positivity of 15 out of 86 dissected ticks (17.71%), and among the organs, 15 out of 86 cuts of the intestine and salivary gland were positive (17.71%), while only 10 among 86 ovary samples were positive (11.62%). Variables intrinsic to animals were did not influence in the infection of their ticks by E. canis. Ticks in the dry season were 3.97 times more likely to be infected with E. canis than in the rainy season (CI: 0.89 - 17.71, p <0.05). Ticks collected at altitudes above 650 m. were 2.86 times more likely to be infected by E. canis than ticks collected at altitudes below 650 m (CI: 0.9 - 9.15, p = 0.05). The strain of ticks involved in the transmission of E. canis under the conditions of the present study was found to be tropical through digestion by restriction enzymes of an amplified product of mitochondrial DNA that transcribes into the 16S subunit of the ribosomal RNA (16S rRNA).

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