QUALIDADE DO SÊMEN CANINO SUBMETIDO A UM PROTOCOLO DE CONGELAMENTO RÁPIDO COM ADIÇÃO DE MELATONINA

RESUMO

Este trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos da adição de melatonina, em diferentes concentrações, no congelamento de sêmen canino, com propósito de reduzir o estresse oxidativo devido ao processo de congelamento. Foram utilizados sêmen de seis cães machos, da raça Bulldog Francês, adultos, com idade entre dois e cinco anos, realizando-se três coletas de sêmen a cada 15 dias. O diluidor utilizado foi composto por Tris-gema e etilenoglicol 5%, e a melatonina foi acrescentada ao sêmen em cinco concentrações diferentes, sendo o grupo controle sem adição de melatonina (T0), e os demais grupos com adição de 1 mM (T1), 1,5 mM (T2), 2 mM (T3), 2,5 mM (T4) e 3 mM (T5). O sêmen foi submetido a refrigeração a 4ºC por 1h, foi mantido a 4cm do vapor de nitrogênio líquido por 10min e posteriormente imerso em nitrogênio líquido para criopreservação. O sêmen foi descongelado em banho-maria a 37ºC por 1 minuto e foram avaliados parâmetros cinéticos pelo software CASA-SCA, morfologia, integridade de membrana e marcadores do estresse oxidativo como catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e malondialdeído (MDA). Houve alta correlação (p<0,05) entre os parâmetros cinéticos do sêmen fresco (taxas de motilidade, velocidade curvilínea VCL, velocidade linear progressiva VSL, velocidade média da trajetória VAP e freqüência do batimento cruzado BCF). Não houve diferença significativa (p>0,05) nos parâmetros cinéticos, morfologia, integridade de membrana, níveis de MDA ou atividade enzimática antioxidante de CAT e SOD quando comparados os diferentes tratamentos instituídos com melatonina. Não houve correlação significativa (p>0,05) entre concentração espermática, proteína total, níveis de melatonina adicionada e variáveis relacionadas com qualidade do sêmen. Foi possível avaliar a eficácia do protocolo de congelamento e descongelamento para cães da raça Bulldog Francês, além de permitir uma avaliação completa do sêmen fresco no software CASA-SCA motility, definindo os padrões cinéticos dessa raça em específico. Conclui-se que a adição de melatonina no congelamento de sêmen canino não proporcionou melhoras significativas no estresse oxidativo e na qualidade do sêmen descongelado.

ABSTRACT

The aim of this study are evaluate the addition of melatonin, in different concentrations, in freezing canine semen. The purpose is reducing oxidative stress, due to cryopreservation process. Six males dogs, adults, with age of two to five years were used in the study, making three semen collection, every fifteen days. The extender used was composed by Tris-egg yolk and ethylene glycol 5%, and melatonin added in the semen in five different concentrations, being a control group without addition of melatonin (T0), and the others groups with 1 mM (T1), 1,5 mM (T2), 2 mM (T3), 2,5 mM (T4) e 3 mM (T5) of melatonin. The semen was refrigerated at 4ºC for 10 minutes, after positioned 4cm above the liquid nitrogen level, until it is plunged into liquid nitrogen for cryopreservation. The semen was thawed in water bath at 37ºC for one minute and evaluated for the kinetic parameters in software CASA-SCA, morphology, membrane integrity and parameters of oxidative stress, such as catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), and malondialdehyde (MDA). A positive correlation were observed (p<0,05) between kinetic parameters of fresh semen (total and progressive motility, velocities curvilinear VCL; straight-line VSL; average path VAP and beat cross frequency BCF). There was no significant difference (p>0,05) in the kinetic parameters, morphology, membrane integrity, MDA or antioxidant ativity of CAT and SOD if the different treatments with melatonin are compared. There is no significant correlation (p>0,05) between sperm concentration, total protein, melatonin levels and variables related to semen quality. It was possible to evaluate the efficacy of the freezing and thawing protocol for frenchie bulldog canines, in addition to a thorough assessment about fresh semen in computer program CASA-SCA motility, defining kinetic patterns specifically for that breed. Melatonin addition in freezing canine semen didnt provide significant increases in pos-thawing quality semen and does not decrease oxidative stress.