UTILIZAÇÃO DE RETINÓIDES E FATOR DE CRESCIMENTO NA PRODUÇÃO in vitro DE EMBRIÕES BOVINOS
Lima, Paulo Fernandes De.
Tese
em Português
| VETTESES
| ID: vtt-6323
Resumo
O objetivo deste estudo, dividido em dois experimentos, foi avaliar o efeito benéfico dos retinóides e fator de crescimento na produção In vitro de embriões bovinos. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o efeito do retinol no desenvolvimento inicial de embriões Bos indicus submetidos à cultura até os estágios de blastocisto em KSOM ou SOF (Experimento 1) ou à co-cultura com monocamadas de células de oviduto (MCO) nos meios KSOM ou SOF. Um total de 3149 oócitos foram selecionados para MIV e incubados em TCM 199 suplementado com 25 mM de HEPES a temperatura de 39º C em ar com 5% de CO2 durante 24 horas. A FIV foi realizada em meio mDM. Os zigotos tratados em KSOM+retinol, KSOM, SOF+Retinol E SOF foram incubados em umidade máxima a 39º C com 5% O2 e 90% N2 (Experimento 1). Os zigotos tratados em KSOM+retinol+MOC, KSOM+MCO, SOF+retinol+MCO e SOF+MCO foram incubados a temperatura de 39º C com 5% de CO2 (Experimento 2). No Experimento 1, as médias de blastocistos (dia 7) foram de 14,6¨% (KSOM+retinol), 15,8% (KSOM), 16,4% (SOF+retinol) e 15,9% (SOF). No Experimento 2, as médias de blastocistos (dia 7) foram de 25,4% (KSOM+retinol+MCO), 14,2% (KSOM+MCO), 24,3% (SOF+retinol+MCO) e 15,9% (SOF+MCO). O mesmo perfil de influência foi observado na formação de blastocisto expandido (dia 9) e eclodido (dia 11). Estes resultados demonstram que a adição de 0,28 ?g/mL de retinol ao meio de cultura utilizado neste estudo teve um significante (p < 0.05) e positivo efeito no desenvolvimento inicial de embriões bovinos, nas condições testadas, e pode ser utilizado para aumentar produção In vitro de embriões. O segundo estudo foi conduzido para investigar os efeitos benéficos do Retinol e do AR no meio de maturação e do IGF-I no meio de cultura de embriões sob condições quimicamente definidas. Um total de 2787 oócitos foram selecionados para MIV, sendo incubados a temperatura de 39º C em atmosfera úmida contendo 5% de CO2 durante 24 horas. No Experimento 1 a MIV foi realizada num meio básico (bMM) e neste meio suplementado com Retinol (0.3 ?M) e AR (0.5 ?M). A FIV foi efetuada em meio mDM e para o desenvolvimento dos presumíveis zigotos e embriões foi utilizado o meio KSOM. O Retinol e o AR adicionados ao bMM aumentaram (p < 0,05) a produção de blastocistos quando comparada com à do grupo controle (Experimento 1.1). No Experimento 1.2, usando embriões originados de oócitos previamente tratados com Retinol ou AR, os presumíveis zigotos foram colocados em gotas de KSOM e os embriões (2-4 células) em novas gotas de KSOM suplementado ou não com IGF-I. Porcentagens de embriões com 2-4 células que desenvolveram até os estádios de blastocistos e blastocistos expandidos foram maiores (p < 0,05) quando o meio de cultura de embriões foi enriquecido com IGF-I. No Experimento 2.1 a MIV foi realizada no bMM+FSH associado ao Retinol (0,3 ?M) ou ao AR (0,5 ?M) . Para o desenvolvimento embrionário, os presumíveis zigotos foram colocados em gotas de KSOM. Adição de Retinol ou AR ao meio de maturação elevou (p < 0,05) a formação de blastocistos. A suplementação do meio de cultura de embrião com IGF-I resultou em altas proporções (p < 0,05) de embriões no estádio de 2-4 células desenvolverem aos estádios de blastocisto, blastocisto expandido e blastocisto eclodido. No Experimento 2.2, utilizando embriões originados por oócitos previamente tratados com Retinol e AR, os presumíveis zigotos foram também colocados no meio KSOM e os embriões (2-4 células) em novo KSOM suplement
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