Polimorfismos do gene bm86 de Boophilus microplus canestrini, 1887 (acari: ixodidae) e análise da conservação genética de peptídeos integrantes da vacina sintética SBm7462

RESUMO

RESUMO SOSSAI, Sidimar M. S., Universidade Federal de Viçosa, outubro de 2004. Polimorfismos do gene bm86 de Boophilus microplus canestrini, 1887 (acari ixodidae) e análise da conservação genética de peptídeos integrantes da vacina sintética SBm7462. Orientador Joaquín H. Patarroyo Salcedo. Conselheiros Marlene Isabel Vilória Vargas e Everaldo Gonçalves de Barros O carrapato B. microplus é considerado o principal ectoparasita para a pecuária bovina mundial. Seu controle repousa pesadamente sobre a utilização de acaricidas que a cada ano que passa se mostram menos eficientes devido a aquisição de resistência pelo parasita. Como alternativa ecologicamente segura para controlar este parasito, tem sido desenvolvidas vacinas derivadas de antígenos ocultos para o sistema imune do hospedeiro. Porém, falhas vacinais com a glicoproteína Bm86 recombinante já tem sido descritas devido à polimorfismos no seu gene em diferentes populações de B. microplus. Já foi descrito variações de até 8.6% na seqüência deste gene. Uma variante da Bm86, denominada Bm95, foi identificada e também utilizada como vacina recombinante, revertendo os resultados negativos naquelas populações que foram resistentes à vacinação com a Bm86, mas com eficiências variáveis. Pesquisadores do Laboratório de Biologia e Controle de Hematozoários, da Universidade Federal de Viçosa, MG desenvolveram uma vacina sintética composta de três peptídeos derivados da Bm86, sendo que um deles, o 4824, é considerado o principal indutor da produção de anticorpos anti-SBm7462. Com o intuito de avaliar mutações no gene bm86 e a conservação da seqüência peptídica 4824 foram analisadas 30 populações de carrapatos B. microplus, de regiões geograficamente distintas do Brasil e países vizinhos. Para isso foi sintetizado, através do RNA total extraído das amostras, o cDNA que serviu de molde nas reações de PCR para amplificação da seqüência nucleotídica compreendida entre os nucleotídeos 278 ? 1071. O material amplificado foi clonado em vetor pGEM® e seqüenciado em seqüenciador automático pelo método enzimático. A análise foi feita através de alinhamento de múltiplas seqüências pelo programa BioEdit versão 5.0.5 e a verificação de polimorfismos por inspeção visual. As análises confirmaram as conservações das seqüências nucleotídicas e aminoácidicas do peptídeo 4824 e revelaram variabilidade genética dentro do gene bm86 entre as amostras pesquisadas. Através do sequenciamento do fragmento que codifica o peptídeo 4822 foi possível determinar que os testes realizados com a vacina sintética SBm7462 foram em amostras que divergiam em dois aminoácidos da seqüência peptídica da vacina, além de apresentarem variações superiores a 4.94% na seqüência da glicoproteína intestinal. ABSTRACT SOSSAI, Sidimar M. S., Universidade Federal de Viçosa, october of 2004. Polimorphisms of the gene bm86 of Boophilus microplus canestrini, 1887 (acari ixodidae) and analysis of the genetic conservation of integral peptides of the synthetic vaccine SBm7462. Adviser Joaquim H. Patarroyo Salcedo. Committee members Marlene Isabel Vilória Vargas and Everaldo Gonçalves de Barros. The tick B. microplus is considered the main ectoparasite for the world bovine cattle. Its control rests heavily about the acaricides use that are less efficient due to resistance acquisition on the part of the parasite to every year that passes. As alternative ecologically holds to control this parasite, it has been developed derived vaccin