Produção in vitro de embriões bovinos em meio suplementado com soro, bsa ou pva e congelamento ultra-rápido

RESUMO

Neste estudo avaliou-se o efeito de diferentes fontes protéicas nos meios de maturação e cultivo sobre a produção in vitro de embriões bovinos (PIV; Experimento 1). Além disso, foi testado um protocolo para congelamento ultra-rápido de embriões PIV com meio de manutenção Emcare (ICP), etilenoglicol e trealose em dois experimentos independentes (Experimento 2) . No Experimento I, quinhentos e trinta e três (n=533) complexos cumulus-oócitos (CCO) bovinos foram maturados e cultivados in vitro em meio suplementado com soro de égua em estro (SEE; n=150), soro de vaca em estro (SVE; n=123), álcool polivinílico (PVA; n=128) e albumina sérica bovina (BSA; n=132). Não houve diferença na produção de embriões no D7 entre os tratamentos SEE (33/142; 23%) e SVE (34/103; 33%) sendo ambos superior (P<0,05) aos tratamentos PVA (6/116; 5%) e BSA (4/126; 3%). No Experimento II, blastocistos e blastocistos expandidos (n=90) provenientes do 7º e 8º dias de cultivo foram expostos à solução Emcare com 3,0M Etilenoglicol (EG)+ 0,1, 0,3 ou 0,5M de trealose, por 2 minutos, à temperatura de 35°C para examinar o seu efeito sobre o desenvolvimento in vitro de embriões bovinos. Imediatamente após, os embriões foram lavados e cultivados em gotas de 100?L de meio SOFaaci distribuídas em placas 60x15mm, sob óleo mineral, em estufa a 38,5oC, 5% CO2 em ar e umidade saturada, por 48h. Blastocistos e blastocistos expandidos (n=198) foram congelados após exposição por 2 minutos, à solução Emcare + 3,0M EG+ 0,1, 0,3 e 0,5M de trealose, mantidas a 35ºC. Durante este período os embriões foram envasados em palhetas de 0,25mL, seladas e mantidas por 20 segundos no vapor de N2 líquido antes de serem submersas no N2 liquido. O descongelamento foi efetuado com 3 diferentes protocolos. O cultivo embrionário foi efetuado em 400?L de SOFaaci, em placas Nunc acondicionadas em bolsas gaseificadas com 5%CO2, 5%O2 e 90%N2, em estufa a 38,5oC, por 48h. Não constatou-se viabilidade embrionária pós-descongelamento independente do protocolo utilizado. As soluções de EG-trealose foram de baixa toxicidade (P>0,05), no entanto não conferiram proteção suficiente aos embriões de todos os tratamentos pós-descongelamento