Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-7217

Resumo

Na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, as variações de resultados entre equipes estão relacionadas aos diferentes protocolos e sistemas, influenciadas especialmente pela densidade de estruturas, tanto na maturação quanto na fecundação e no cultivo. Com o objetivo de determinar a influência do número de oócitos ou embriões por gota e do volume da gota nas diferentes fases da PIV em bovinos, foram conduzidos três experimentos. Complexos cumulus-oócitos (CCO) obtidos de ovários de matadouro foram selecionados e maturados in vitro (MIV) por 24h em TCM-199 modificado, acrescido rFHS-h e soro de vaca em estro. O sêmen congelado selecionado por migração ascendente (1 x 106 células/mL) foi utilizado para a fecundação in vitro em Fert-Talp com heparina e PHE, por 18h. Os possíveis zigotos foram cultivados in vitro (CIV) em SOFaaci, por 8 dias. Todas etapas da PIV nos Experimentos I e II foram conduzidos em estufa a 39ºC, com 5% de CO2 em ar e umidade saturada. O Experimento III foi conduzido a 38,5ºC. No Experimento I (7 repetições), os oócitos (n=1186) foram distribuídos aleatoriamente (fatorial 3x3), sendo avaliados 3 grupos de oócitos (5, 10 e 20 oócitos) e 3 proporções de volume de meio (1:1, 1:5 e 1:10?L) durante a MIV, sendo a FIV e CIV realizada em grupos de 20 CCO em 200?L meio. No Experimento II, concluída a maturação dos grupos de 20 CCO/200?L, os oócitos (n=672) foram distribuídos aleatoriamente em 6 repetições, avaliando-se 3 grupos de oócitos (5, 10 e 20) e 2 proporções e volume de meio (1:5 e 1:10) durante fecundação, num fatorial 3x2, sendo o CIV conduzido também com 20 CCO/200?L. No Experimento III, após a MIV e FIV (20 CCO/200?L), os embriões (n=1428) foram distribuídos aleatoriamente em 8 repetições, em 3 distintos grupos com 5, 10 e 20 embriões e 3 volumes de meio (1:1, 1:5 e 1:10) num fatorial 3x3. As avaliações foram efetuadas no D2 (clivagem), D7 (blastocistos), D9 (blastocistos eclodidos), considerando-se o dia da fecundação, como D0. No Experimento I, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de clivagem e de eclosão, com 5, 10 e 20 CCO, independente do volume de meio de maturação. No entanto, o grupo de 5 embriões apresentou menor índice de desenvolvimento em D7 (18,6%), quando comparado com os grupos de 10 (26,3) ou 20 (28,4%) oócitos. Os índices de produção (clivagem, D7 e D9) também foram semelhantes nas diferentes proporções de meio, havendo apenas uma redução na taxa de eclosão na relação 1CCO:1?L. No Experimento II, o número de CCO cultivados por grupo (5, 10 ou 20) não influenciou (P>0,05) nos índices de clivagem, embriões em D7, D9 e eclosão. Nas diferentes proporções de volume de meio:CCO, as taxas de clivagem, D9 e eclosão também foram semelhantes (P>0,05). No Experimento III, o cultivo em grupos de 20 embriões foi superior (P<0,05) em D7 (25,8%) quando comparado aos grupos de 10 ou 5 embriões (20,4 e 16,4%, respectivamente). A proporção CCO/volume de meio (1:1?L) reduziu os índices de embriões em D7 (16,5%), quando comparado com as proporções 1:5?L (22,9%) e 1:10?L (23,2%). A taxa de eclosão sobre o total de estruturas clivadas (7,5%) ou sobre D7 (35,9%) para o volume de meio de cultivo 1:1?L também foi inferior (P<0,05) quando comparado aos volumes 1:5?L (12,6 e 44,9%) e 1:10?L (13,3 e 46,8%), respectivamente. A produção in vitro de embriões é incrementada pelo maior número de oócitos e embriões empregado durante a MIV e CIV, apresentando ainda melhores resultados quando o cultivo é realizado em maiores

Biblioteca responsável: BR68.1