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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-7814

Resumo

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do bloqueio da maturação in vitro (MIV) no desenvolvimento de embriões suínos produzidos por fecundação in vitro (FIV), ativação partenogenética (AP) e transferência nuclear (TN). Avaliou-se também a eficiência dos meios PZM3 e NCSU23 no cultivo de embriões suínos pós FIV e AP. Oócitos provenientes de ovários de matadouro foram divididos em 16 grupos de maturação: dois meios (TCM199 ou NCSU23), suplementação com PFF ou PVA e 4 tratamentos hormonais. Diante dos resultados de maturação, o grupo TCM199 suplementado com PFF e acrescido do tratamento hormonal 2 foi escolhido como Controle para os demais experimentos. Na segunda etapa dos experimentos foi avaliada a eficiência dos bloqueadores da maturação, Butirolactona I e Ciclohexemide (CHX). Ambos foram eficientes no bloqueio, mas somente o Ciclohexemide apresentou índice de metáfase II (MII) semelhante ao Controle (70,29% e 75,49%, respectivamente). Ao avaliar a cinética de maturação, os grupos Ciclohexemide às 40 horas e Controle às 44 horas apresentaram os maiores índices de oócitos em MII com o 1ºCP e a placa metafásica adjacentes. Após a MIV (40 horas no Ciclohexemide ou 44 horas no Controle), os oócitos tiveram as células do cumulus oophurus removidas, sendo fecundados por 6 horas ou ativados por choque elétrico ou enucleados, reconstruídos e submetidos a eletrofusão e ativação por choque elétrico. Tanto os oócitos quanto os complexos citoplasma receptor-núcleo doador foram submetidos a 2 pulsos elétricos DC de 1,5KV/cm por 30µs, incubados por 1 hora em meio de cultivo suplementado com 10µg/ml de Ciclohexemide e novamente submetidos a 2 pulsos elétricos DC de 1,5KV/cm por 60µs. Os prezumíveis zigotos oriundos de FIV e AP foram cultivados nos meios PZM3 e NCSU23 e os oriundos de TN no meio NCSU23. O desenvolvimento embrionário foi avaliado pelos índices de clivagem no dia 3 e de blastocistos no dia 7 de cultivo. A qualidade dos embriões foi avaliada quanto ao número de células após 7 dias de cultivo. Na FIV, o meio PZM3 foi mais eficiente do que o NCSU23, pois apresentou melhores índices de clivagem no grupo com bloqueio (PZM3=68,4% e NCSU23=44,4%) e melhores índices de blastocistos no grupo sem bloqueio (PZM3=13,4% e NCSU23=5,6%). Já na ativação partenogenética (AP), o meio NCSU23 foi mais eficiente do que o PZM3, pois apresentou melhores índices de clivagem no grupo com bloqueio (NCSU23=89,5% e PZM3=78,5%) e melhores índices de blastocistos nos grupos com (NCSU23=20,4% e PZM3=13,0%) e sem bloqueio (NCSU23=22,5% e PZM3=10,8%). Não houve efeito dos meios de cultivo sobre o número de células dos blastocistos produzidos por FIV e AP. Na FIV, o bloqueio da maturação melhorou os índices de clivagem nos grupos cultivados em PZM3 (com=68,4% e sem bloqueio=50,6%), mas não melhorou os índices de blastocistos em ambos os meios. Na ativação partenogenética, o bloqueio da maturação melhorou os índices de clivagem nos grupos cultivados em NSCU23 (com=89,5% e sem bloqueio=80,3%), contudo não melhorou os índices de blastocistos em ambos os meios. Na TN, o bloqueio da maturação não influenciou os índices de fusão (com=14,5% e sem bloqueio=12,8%) e de clivagem (com=60% e sem bloqueio=66,7%). O bloqueio da maturação diminuiu o número de células dos blastocistos produzidos por FIV (PZM3 com=35,73±15,76 e sem bloqueio=46,40±13,73 e NCSU com=34,44±12,7 e sem bloqueio=49,41±18,42). No entanto, aumentou o número de células dos blastocistos produzidos por AP (PZ

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