Diagnóstico e aspectos moleculares do papilomavírus bovino tipo 2 em rebanhos bovinos com hematúria enzoótica

RESUMO

Em bovinos a infecção pelo papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2) está associada à formação de tumores na mucosa da bexiga e ao quadro clínico de hematúria enzoótica. Essa doença, de ocorrência mundial, causa prejuízos econômicos consideráveis na pecuária bovina de corte e leite. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de sistemas de PCR para o diagnóstico e caracterização molecular do BPV-2 em amostras biológicas provenientes de rebanhos bovinos com hematúria enzoótica. Para o diagnóstico do BPV-2 foi desenvolvida uma “semi-nested PCR” para a amplificação de um fragmento de 386 pb do gene L1. A técnica foi realizada na forma de “multiplex” com a inclusão de um controle interno da reação que amplifica um fragmento de 626 pb do gene ND5 do DNA mitocondrial bovino. A presença do BPV-2 foi avaliada em 52 amostras de bexiga com lesões macroscópicas, provenientes de bovinos com sinais clínicos de hematúria enzoótica. Como controle, foram incluídas 10 amostras de bexiga sem lesões macroscópicas obtidas de animais assintomáticos. No grupo de bexigas com lesões, 67% (35/52) das amostras foram positivas. No grupo controle, em apenas 1 (10%) amostra foi possível a amplificação do gene L1 do BPV-2. Esse resultado evidencia o envolvimento do BPV-2 nas transformações neoplásicas observadas em bexigas de bovinos com sinais clínicos de hematúria enzoótica. A presença do BPV-2 foi também avaliada em diferentes categorias (vacas, novilhas, bezerros) de bovinos da raça Nelore provenientes de um rebanho de corte da região Norte do Estado do Paraná, com histórico de hematúria enzoótica endêmica. Foram avaliadas por “semi-nested-PCR” 101 amostras de sangue que proporcionaram resultados positivos em 46% (47/101) das amostras sendo, 61% (27/44) em vacas, 44% (14/32) em novilhas e 24% (6/25) em bezerros. A análise estatística da distribuição dos resultados positivos por categoria de animal avaliada demonstrou relação significativa (P=0.0106) entre o diagnóstico do BPV-2 e a categoria de vacas em reprodução. Com o objetivo da avaliação molecular complementar por meio da identificação da forma viral e também do local de rompimento do genoma do BPV-2 em bexigas de bovinos com lesões tumorais foram também desenvolvidas técnicas de PCR e nested-PCR para a detecção da integridade dos genes E1, E2, E5 e da região LCR do BPV-2. Amostras de papilomas cutâneos, utilizadas como controle dos sistemas, evidenciaram a presença do BPV-2 em neoplasias epiteliais benignas na forma epissomal e em múltiplas cópias. Em amostras de bexiga com lesões macroscópicas foi possível evidenciar a ruptura do genoma viral nas posições inicial e intermediária do gene E1, sugerindo que em amostras tumorais o BPV-2 pode estar integrado ao genoma hospedeiro. A detecção do BPV-2, tanto em amostras de bexiga com lesões macroscópicas quanto em amostras de sangue proveniente de rebanho bovino com hematúria enzoótica endêmica, evidencia o envolvimento viral na etiologia dessa doença. A demonstração da presença do BPV-2 na forma epissomal em neoplasias epiteliais benignas em bovinos e a evidência da ruptura do genoma viral na região gênica E1 em lesões neoplásicas de bexiga sugere que a integração viral seja um importante passo para a formação tumoral e o desenvolvimento do quadro clínico de hematúria enzoótica em bovinos