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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-8178

Resumo

A tricomonose bovina é uma doença venérea que causa infertilidade e aborto em bovinos. O agente etiológico é o protozoário Tritrichomonas foetus, cujo habitat é o trato genital destes animais. Os protocolos desenvolvidos até o presente para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou são incapazes de distinguir T. foetus de outras espécies do gênero. Com o objetivo de buscar maior especificidade no diagnóstico molecular desta enfermidade, os estudos foram conduzidos na tentativa de avaliar e otimizar ensaios de PCR e nested-PCR, empregando-se novos primers selecionados a partir do alinhamento das seqüências dos genes 18S rRNA, 5,8S rRNA, 28S rRNA e do primeiro e segundo espaços transcritos do rDNA (ITS1 e ITS2). As seqüências foram obtidas junto ao GenBank referentes ao gênero Tritrichomonas e outros organismos da família Trichomonadidae. Foi construído um par de primers para reação espécie-específica e outro para a amplificação gênero-específica. A análise pelo BLASTn (basic local alignment search tool nucleotide GenBank) indicou a especificidade para cada primer. A avaliação da especificidade foi complementada então pelos ensaios de PCR testando os seguintes DNAs genômicos: Bos taurus, Herpesvirus bovino tipo-1, seis espécies de Brucella, 24 sorovares de L. interrogans, Campylobacter fetus venerealis, Campylobacter fetus fetus, Ureaplasma diversum, Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma bovis, Listeria monocytogenes e Neospora caninum. Nenhuma reação cruzada foi observada nestas reações. No entanto, a reação de PCR espécie-específica, reconheceu, além do DNA genômico de T. foetus, o de Tritrichomonas suis. A sensibilidade dos ensaios de PCR e de nested-PCR apresentados neste estudo permitiram um limiar de detecção de até dois parasitos em meio de cultura para diagnóstico

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