Preservação de folículos pré-antrais bovinos

RESUMO

A manutenção da viabilidade folicular durante o transporte de ovários é de fundamental importância para o sucesso de técnicas como a criopreservação e cultivo in vitro. Entretanto, geralmente a coleta dos ovários ocorre em locais distantes dos laboratórios especializados em biotécnicas reprodutivas. Neste sentido, este trabalho teve como objetivos: 1) investigar a eficiência da solução salina 0,9% (SS) e TCM 199 na preservação de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos in situ em diferentes temperaturas e tempos de incubação (Fase I); 2) avaliar a viabilidade e ultra-estrutura de FOPA bovinos criopreservados com ou sem prévio armazenamento do tecido ovariano (Fase II). Na Fase I, ainda no abatedouro, o par ovariano de cada animal (n=5) foi dividido em 25 fragmentos. Um fragmento foi imediatamente fixado para análise histológica (controle). Os demais 24 fragmentos, foram aleatoriamente mantidos em SS ou TCM 199 a 4, 20 ou 39 °C, por 2, 4, 12 ou 24h. Na Fase II, de cada par ovariano (n=5), um fragmento foi também tomado aleatoriamente e imediatamente fixado para análise histológica (controle) e uma pequena parte desse fragmento para análise ultra-estrutural. Em seguida, os ovários foram transportados ao laboratório, um em SS a 20 °C e o outro a 4 ºC, os quais foram mantidos nas citadas temperaturas por 1 (Protocolo 1 - padrão) ou 24h (Protocolo 2), respectivamente. Em seguida, o par ovariano foi dividido em 38 fragmentos e submetidos ao teste de toxicidade (exposição) ou congelação na presença de dimetilsulfóxido (DMSO), propanodiol (PROH), etilenoglicol (EG) ou glicerol (GLI). Em ambas as fases (I e II), o percentual de FOPA normais e degenerados oriundos do controle e dos diferentes tratamentos foram comparados através do teste do Qui-quadrado (P<0,05). A conservação a 4 ºC, em ambas as soluções, manteve a percentagem de FOPA normais similar ao controle. Além disso, em ambas as soluções, independente do tempo de incubação, a percentagem de folículos normais após conservação a 39 ºC foi (P<0,05) inferior àquela obtida com 4 e 20 ºC. Com relação à Fase II, o transporte dos ovários a 20 °C, bem como o resfriamento prévio a 4 °C/24h, não reduziram (P>0,05) o percentual de FOPA viáveis quando comparado ao controle. Além da histologia no controle, foi analisada a viabilidade folicular através do corante vital azul de Trypan, e os dados confirmados pela análise da ultra-estrutura folicular através da microscopia eletrônica de transmissão. Resultados similares foram obtidos quando os fragmentos, respectivamente resfriados ou não, foram expostos ao MEM, EG 1,5 M, bem como congelados na presença de EG 1,5 M. O DMSO 1,5 M apresentou-se similar ao controle apenas após exposição e congelação sem resfriamento prévio a 4 ºC. Pode-se concluir que FOPA bovinos podem ser conservados eficientemente a 4 ºC por até 24h em SS, e que o armazenamento do tecido ovariano nesta solução, tempo e temperatura não afeta o sucesso da congelação de FOPA bovinos, desde que na presença de EG 1,5 M