Portal de Pesquisa da BVS Veterinária

Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-8493

Resumo

Este trabalho teve como objetivo estudar o perfil das proteínas da membrana externa (PMEs) da Leptospira interrogans sorovariedade hardjoprajitno por meio da eletroforese uni e bidimensional e testes de Western blot. Foram utilizadas técnicas de extração da membranaexterna com Triton x114 e precipitação das proteínas com acetona. As imagens foram analisadas pelo programa de computador Gel-Proanalyze 3.1. (MediaCybernetics®) para determinação da massa molecular das proteínas detectadas nos géis bidimensionais e nasmembranas de nitrocelulose. Na eletroforese unidimensional foram visualizadas 14 bandas de proteína, sendo que quatro delas, de massas moleculares eqüivalentes a 63 KDa (LipL63), 47 KDa (LipL48), 29 KDa (LipL32) e 22 KDa (LipL22/Loa22), apresentaram-se como os principais componentes das proteínas de membrana externa. Nos géis de eletroforese bidimensional foram visualizadas 35 bandas de roteínas que predominam na membrana externa dessa leptospira, sendo que cinco delas se destacaram como de maior intensidade: 22,54 KDa(LipL22), 30/26 KDa (LipL32), 34,41 KDa (PME34), 42,75 KDa (LipL41) e 58,59 KDa (LipL63).. A eletroforese bidimensional mostrou-se com maior poder de resolução para separação das PMEs em comparação com a eletroforese unidimensional. Os testes de Western blot realizados com soros de coelhos hiperimunizados identificaram nove proteínas reagentes nos soros dos coelhos de massas moleculares de 51,1 KDa, 36 KDa, 27 KDa, 24,5 KDa, 20,5 KDa, 17,7 KDa e 14 KDa. Em soros de bovinos apenas duas proteínas modularam a resposta imune desses animais com pesos aparentes de 47 KDa (Pme45) e 29 KDa (LipL32). A diferença encontrada nos resultados dos soros de bovinos naturalmente infectados em relação aos resultados encontrados nos soros dos coelhos hiperimunizados podem ser atribuídas às diferenças de patogenicidade das amostras de Leptospiras que infectaram esses animais. As amostras que infectaram os bovinos estavam se mantendo na natureza, enquanto as amostras que foram utilizadas para produzir o soro hiperimune tem sido mantidas em laboratório a muito tempo

---

Outer membrane proteins (OMPs) were isolated from Leptospira interrogans serovar hardjoprajitno using Triton X114, precipitated with acetone, and separated by electrophoresis 2-D and SDS PAGE and resolved by western blot. Gel migration patterns were compared usingimage analysis of 35 gel-purified proteins. Among the proteins identified by this approach included the outer membrane lipoproteins ipL22/Loa22, LipL32, Omp34, LipL41 and LipL63. The SDS PAGE identified 14 protein profiles in total. The major leptospiral OMPs were 63 KDa (LipL63), 47 KDa (LipL48), 29 KDa (LipL32) and 22 KDa (LipL22/Loa22). The results by western blot showed that antiserum from experimentally infected rabbits and naturally infected bovine evidentiated different protein patterns. The outer membrane proteins of 51,1 KDa, 36 KDa, 27KDa, 24,5 KDa, 20,5 KDa, 17,7 KDa and 14 KDa were principally detected by rabbit antibody. In contrast, two leptospiral OMPs of 47 KDa (Omp45) and 29 KDa (LipL32) were detected in significantly greater amounts using bovine serum. These findings suggested differences asdetermined by patogenicity and protein structure of L. interrogans serovar hardjoprajitno

Biblioteca responsável: BR68.1