Caracterização imunofenotípica de gastrina, colecistoquinina, neuropeptídeo Y e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina no sistema digestório do dourado Salminus brasiliensis
Pereira, Raquel Tatiane.
Tese
em Português
| VETTESES
| ID: vtt-904
Resumo
O sistema neuroendócrino difuso (SNED) compreende vários tipos de células do sistema gastrintestinal que produzem e secretam diferentes peptídeos, os quais exercem diversos efeitos sobre o processo digestório e o comportamento alimentar. O objetivo foi estudar, utilizando imunohistoquímica, a distribuição de células endócrinas do SNED imunopositivas aos peptídeos GAS, CCK-8, NPY e CGRP no sistema digestório de dourado Salminus brasiliensis. Foram utilizados 12 juvenis de dourado com peso de 144,8±21,7 g e comprimento total de 25,5±3,5 cm. Após 24 horas de jejum, os peixes foram eutanasiados e retiradas amostras em cinco diferentes segmentos: estômago: região pilórica estomacal (PE); intestino médio: cecos pilóricos (CP), alça 1 (A1) e alça 2 (A2) e intestino posterior (IP). As amostras de tecido foram fixadas em Bouin por 12 horas, colocadas em álcool 70% e processadas segundo métodos histológicos de rotina. Para a imunohistoquímica todas as reações foram feitas em câmara úmida e, nos procedimentos de lavagem, utilizou-se PBS 0,1 M. O bloqueio da atividade da peroxidase endógena e de ligações inespecíficas foi feito utilizando-se reagentes comerciais Dako®. As amostras foram incubadas com anticorpos primários policlonais (Bachem, EUA) contra GAS, CCK-8, NPY e CGRP. Posteriomente, foram incubadas com anticorpo secundário anticoelho EnVision+System/HRP, reveladas pelo método enzimático utilizando 3,3 tetra-hidrocloreto diaminobenzidina, DAB, e contracoradas com hematoxilina de Carazzi. O número médio de células endócrinas imunorreativas para cada peptídeo em cada segmento amostrado e em cada peixe foi determinado pela contagem total de células imunomarcadas. O número total de células foi contado, utilizando-se o microscópio, enquanto a área foi mensurada a partir da captura da imagem (objetiva de 20x) correspondende à área total de mucosa epitelial determinada usando o programa Image J. Os dados resultantes foram submetidos à ANAVA em esquema fatorial e as médias comparadas pelo teste de Tukey, a 5%. A utilização de anticorpos desenvolvidos contra peptídeos de mamíferos foi mostrada, pela primeira vez, ser eficiente na imunolocalização de GAS, CCK-8, NPY e CGRP no dourado. Todos os peptídeos foram identificados em todos os segmentos amostrados, ainda que escassos em determinados segmentos. O maior número de células endócrinas imunopositivas a GAS, CCK-8 e CGRP estava principalmente na região pilórica estomacal e nos cecos pilóricos. Já para o NPY, as células imunomarcadas estavam notavelmente restritas ao intestino médio do dourado
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BR68.1