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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-9271

Resumo

O trabalho teve como objetivos: avaliar in vitro o sêmen caprino congelado nos meios diluentes à base de água de coco em pó (ACP-101) e TRIS (hidroxi-metil amino metano); analisar o efeito de soluções para re-diluição seminal pósdescongelação por meio de parâmetros cinéticos mensurados pelo sistema Sperm Class Analyser e; comparar a eficiência do corante azul de bromofenol (AB) com o corante clássico de eosina-nigrosina (EN) na avaliação morfológica do sêmen caprino fresco e descongelado submetidos ao teste de termo-resistência. Foram utilizados quatro bodes. Os diluentes empregados foram: ACP-101 (+ 2,5% gema ovo + 7% glicerol) e TRIS (+ 20% gema ovo + 6,8% glicerol). Os ejaculados foram coletados por vagina artificial, avaliados quanto a: volume, concentração, motilidade massal, porcentagem de espermatozóides móveis, motilidade individual progressiva, porcentagem de vivos e mortos e, alterações morfológicas. Em seguida, divididos em duas alíquotas, diluídas nos tratamentos experimentais ACP-101 e TRIS. As amostras foram refrigeradas até 4C, envasadas em palhetas, congeladas em vapores de nitrogênio, armazenadas em botijão criogênico (-196C) e descongeladas após 30 dias. As avaliações de motilidade espermática auxiliada por computador foram realizadas aos 5, 60 e 120 minutos pós-descongelação. Para rediluição pós-descongelação foram utilizados diluente base (DB: ACP-101 ou TRIS sem gema e sem glicerol), soluções de Ringer Lactato (RL) e de NaCl a 0,9% (SF). Três palhetas de cada tratamento por ejaculado avaliadas e re-diluídas, com uma das três soluções de re-diluição. Os parâmetros de motilidade espermática auxiliada por computador analisados foram: motilidades total (MT) (%) e progressiva (MP) (%), velocidades média do trajeto do espermatozóide (VAP) (μm/s) e linear (VSL) (μm/s), e população de espermatozóides rápidos (ER) (%). A morfologia espermática foi avaliada, aos 5 e 120 minutos pós-descongelação, por meio de esfregaços corados por EN e AB. Os parâmetros morfológicos avaliados foram: espermatozóides normais (N), alterações de cabeça (AC), de peça intermediária (API), e de flagelo (AF), gotas citoplasmáticas proximal (GCP), e distal (GCD), e cabeça destacada (CD). Os dados foram submetidos à ANOVA e aos teste de Duncan e Tukey (P < 0,05). Independentemente da variável cinética, o tratamento ACP x RL apresentouse significativamente inferior durante o teste de termo-resistência. O diluente à base de TRIS apresentou resultados cinéticos significativamente superiores ao ACP-101, aos 60 e 120 minutos. Os espermatozóides diluídos e congelados no TRIS não sofreram influência das soluções de re-diluição pós-descongelação. Não existiu diferença significativa na observação de N entre tratamentos após 5 minutos do teste de termo-resistência. Após 120 minutos a quantificação de N foi influenciada significativamente pelo diluente, tendo o TRIS apresentado resultados superiores. O período de incubação de 120 minutos a 37oC promoveu o aumento das AC. Os parâmetros cinéticos, após 5 minutos de incubação a 37oC, dos espermatozóides diluídos e congelados em meio à base de ACP-101 demonstram sua potencialidade na criopreservação seminal de bodes. O meio diluente à base de TRIS promoveu uma maior proteção quanto às crioinjúrias em espermatozóides caprinos congelados. O corante azul de bromofenol demonstrou ser eficiente na avaliação do sêmen caprino fresco e pós-descongelação

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The aim of the work was: to evaluate in vitro the goat semen frozen in diluents media based on powder coconut water (PCW-101) and TRIS (hydroxymethyl amino methane); analyze the effect of solution for redilution of semen samples post-thawing through kinetic parameters measured by Sperm Class Analyser and; compare the bromophenol blue stain efficiency with the classic stain eosin-nigrosin on the morphologic evaluation of fresh and post-thawing goat semen submitted to thermo resistance test. Four goats were utilized. The employed diluents were: PCW-101 (+ 2,5% egg yolk + 7% glycerol) and TRIS (+ 20% egg yolk + 6,8% glycerol). The ejaculateds were collected using artificial vagina, assessed for: volume, concentration, mass motility, percentage of motile spermatozoa, and progressive individual motility. Right away, each ejaculate was divided into two aliquots and diluted into the experimental treatments PCW-101 and TRIS. The samples were refrigerated to 4C, glycerolated, loaded into straws, frozen into nitrogen vapors (-100C), stored into cryogenic tank (-196C) and thawed after 30 days. The spermatic motility evaluations assisted by computer were placed into 5, 60 and 120 minutes post-thawing. For redilution post-thawing were utilized basis diluent (BD: PCW-101 or TRIS without yolk and without glycerol), Ringer Lactate solutions (RL) and 0,9% NaCl (PS). Three straws from each treatment were thawed, being each an evaluated and rediluied, with one of the three solutions for redilutions, respectively. The motion parameters assisted by computer assessed were: total motility (TM) (%), progressive motility (PM) (%), average path velocity (VAP) (μm/s), straight linear velocity (VSL) (μm/s), and population of rapid spermatozoa (RS) (%). Spermatic morphology was evaluated at 5 and 120 minutes post-thaw, through semen smears stained by eosinnigrosin (EN) and bromophenol blue (BB). The morphologic parameters evaluated were: normal spermatozoa (N), head alteration (HA), intermediary piece alteration (IPA), tail alteration (TA), proximal citoplasmic drop (PCD), distal citoplasmic drop (DCD), and detached head (DH). The data were analyzed using ANOVA and Duncans and Tukey tests with 5% of probability (SAS Institute Inc, Cary, NC, USA). Independently of the kinetic variable studied, the treatment PCW x RL showed significantly inferior to the other during the thermo resistance test. The media based on TRIS showed kinetic results significantly superior to PCW-101, to the 60 and 120 min. The spermatozoa diluted and frozen on TRIS didnt suffer the redilution solution influence post-thaw. There wasnt significant difference in the observation of N between media staining and their interactions after 5 minutes of thermo resistance test. After 120, the N was significantly influenced by media, where the TRIS presented better results. The incubation period of 120 minutes at 37C affect the spermatic morphology, increasing the HA percentages into all treatments. Kinetic parameters, after five minutes incubated at 37C, of goat spermatozoa diluted and frozen on media based on PCW-101 showed the potentiality of this media on buck seminal cryopreservation. The media based on TRIS promoted better protection from the cryoinjuries on frozen goat spermatozoa. Bromophenol blue staining was efficient on the fresh and post-thaw goat semen evaluation

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