Cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos utilizando ácido-3-indol-ácético (IAA), fator de crescimento fibroblástico-2 (FGF-2) e hormônio folículo estimulante (FSH)
Matos, Maria Helena Tavares De.
Tese
em Português
| VETTESES
| ID: vtt-9273
Resumo
Os objetivos deste estudo foram investigar o efeito do Ácido 3-Indol Acético (IAA), Fator de Crescimento Fibroblástico-2 (FGF-2) e Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos pré-antrais caprinos in vitro, utilizando técnicas de histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Na Fase I, verificou-se o efeito de diferentes concentrações de IAA (10, 20, 40 e 100 ng/ml), FGF-2 (10, 50 e 100 ng/ml) ou FSH (10, 50 e 100 ng/ml). As concentrações que apresentaram os melhores resultados foram: IAA (20 ng/ml), FGF-2 (50 ng/ml) e FSH (50 ng/ml). As maiores taxas de sobrevivência folicular foram observadas após 7 dias de cultivo com FSH (65,6%). Somente após cultivo com IAA (1 e 7 dias) e MEM (7 dias), folículos considerados como morfologicamente normais após análise histológica, revelaram-se degenerados quando examinados ultra-estruturalmente. Ao contrário, os folículos cultivados em FSH e FGF-2 apresentavam-se ultra-estruturalmente normais. Diante deste resultado, o IAA não foi utilizado na Fase II deste estudo, sendo testados somente o FSH e o FGF-2 sozinhos ou a interação entre FSH e FGF-2. Nesta fase, o cultivo com FSH sozinho apresentou as maiores percentagens de folículos normais e a interação FSH + FGF-2 foi mais eficiente para promover a ativação folicular e o crescimento oocitário após 7 dias. Em função deste resultado, o FSH sozinho e a associação FSH + FGF-2 foram utilizados para suplementação do meio no cultivo de longa duração (Fase III). Além disso, no tratamento com FSH, testou-se dois intervalos de troca do meio de cultivo (a cada 2 ou 7 dias). Os resultados mostraram que após 28 dias de cultivo, o FSH (com troca de meio a cada 2 dias) aumentou a sobrevivência, a formação de folículos primários, bem como os diâmetros oocitário e folicular. Em conclusão, este estudo demonstrou que o FSH estimula a ativação de folículos primordiais caprinos e o crescimento de folículos primários após cultivo in vitro de 28 dias. Além disso, a adição de FSH ao meio de cultivo e a troca do meio a cada dois dias mantêm a morfologia de folículos pré-antrais caprinos cultivados por um longo período
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BR68.1