Identificação de antígenos de intestino, ovário e glândula salivar Rhipicephalus (Boophilus) microplus Canestrini, 1887 (Acari: Ixodidae)

RESUMO

Rhipicephalus microplus é o ectoparasita mais disseminado no mundo, causando prejuízos anuais de aproximadamente dois bilhões de dólares para a bovinocultura nacional. Em virtude da importância econômica e da necessidade de se encontrar novas alternativas para o seu controle, este trabalho teve como objetivo a identificação de possíveis imunógenos oriundos de diferentes tecidos do carrapato (intestino, ovário e glândula salivar) através da imunização de animais com extrato de proteínas solúveis destes tecidos e análise por Western Botting, bem como a criação de um banco de dados genômico, por meio do seqüenciamento de bibliotecas de cDNA, que poderá fornecer informações biológicas importantes sobre o parasita. Os experimentos de Western Blotting mostraram a presença de proteínas imunogênicas nos extratos dos diferentes tecidos do carrapato, algumas das quais foram identificadas pelo seqüenciamento da extremidade N-terminal. Concomitantemente, foram construídas seis bibliotecas de cDNA, duas para cada um dos três diferentes tecidos. O seqüenciamento destas bibliotecas produziu 11.965 ESTs, sendo 4.256 de intestino, 4.390 de ovário e 3.319 da glândula salivar. A análise conjunta das ESTs geradas permitiu a identificação de 6.165 genes, sendo que 5.219 (84,65%) codificam proteínas que não apresentam similaridade (UNo hits") com o banco não-redundante de proteínas do NCBI. Quando estas 5.219 seqüências foram analisadas contra um banco contendo todas as seqüências de carrapatos presentes no NCBI, 2.294 (43,95%) apresentaram correspondentes neste banco, mas 2.925 (56,05%) ainda continuaram únicas. São proteínas de carrapato que estão sendo identificadas pela primeira vez, embora não se saiba a função biológica de cada uma delas

ABSTRACT

Rhipicephalus microplus is the most disseminated ectoparasite in the world, causing annual losses around two billion dollars in the Brazilian cattle industry. Due to this ruge economic losses and the necessity of finding new methods for tick control, the aim of this work was the identification of potential immunogens from difterent tick tissues (gut, ovary and salivary gland) using two strategies immunization of animais with soluble protein from these three tissues, followed by Western Blotting analysis, and the generation of a genomic database by sequencing cDNA libraries from these tissues, what can also provide relevant biological information about the parasite. The Western Blotting experiments showed the presence of immunogenic proteins in ali the three tick tissues, with some of them being identified by N-terminal sequencing. A total of six cONA libraries were produced, two for each one of the three tissues, generating 11,968 ESTs after sequencing, being 4,256 from gut, 4,390 from ovary and 3,319 from salivary gland. The analysis of the 11,968 ESTs allowed the identification of 6,615 genes, with 5,219 (84.65%) being proteins that did not have similarity (No hits) with the non-redundant protein database (NCBI)