20102311 / Avaliação ultraestrutural e viabilidade celular de embriões equinos vitrificados em diferentes meios e crioprotetores

RESUMO

Este projeto teve por objetivo comparar diferentes meios e crioprotetores utilizados no processo de vitrificação, avaliando a ultra-estrutura dos embriões nas diferentes fases do processo, a viabilidade celular por meio de sondas fluorescentes e a taxa de gestação destes embriões após a transferência. 0 trabalho foi dividido em uma parte in vitro na qual foram utilizados embriões <300?m divididos em G1 (n=13) vitrificou-se os embriões com meio comercial que tem como base o meio 1 (M1) com 1,4M de glicerol, o M2 com 1,4M de glicerol e 3,6M de etilenoglicol e o M3 com 3,4M de glicerol e 4,6M de etilenoglicol; G2 (n=13) utilizou o meio preparado em nosso laboratório tendo como base o M1 1,4M de glicerol, o M2 1,4M glicerol e 3,6M de metilformamida e o M3 com 3,4M de glicerol e 4,6M de metilformamida; G3 (n=13) utilizou-se o meio preparado em nosso laboratório tendo como base o M1 1,4M de glicerol, o M2 1,4M glicerol e 3,6M de etilenoglicol e 0 M3 com 3,4M de glicerol e 4,6M de etilenoglicol. Foi realizada analise em microscopia eletrônica de transmissão dos embriões após a passagem nos meios de vitrificação e reidratação bem como após o aquecimento após um periodo minimo de uma semana de armazenamento em nitrogênio liquido. A proliferação celular foi avaliada utilizando a coloração imunocitoquimica combinada BrdU/DAPI (5'bromo- 2'deoxy-uridina/4' ,6'-diamino-phenyllindone) pós-aquecimento. Para análise in vivo foram utilizados sete embriões vitrificados do G1 e outros seis do G2, em complemento transferiram-se oito embriões frescos (não vitrificados) como controle. Os resultados laboratoriais mostraram um indice de marcação para multiplicação celular (BrdU/DAPI) de 89,86%b para o grupo controle (embriões frescos), 94,74%ª para 0 G1, 88,42%b para 0 G2 e 94,5%ª para 0 G3. Correlacionando-se o número de células marcadas com DAPI e o tamanho embrionário obteve-se o valor de r (coeficiente

ABSTRACT

The aim of the present study was to compare different cryoprotectors on the vitrification of equine embryos, evaluating its ultrastructure at different moments of the procedure (after passage through the vitrification solutions, without decreasing temperature, and after standard vitrification and storage at liquid nitrogen for at least one week). The cellular viability was accessed using fluorescent probes (BrdU/DAPI) and pregnancy rate was determined after transfer of the vitrified/warmed embryos. The study was divided in a in vitro experiment, embryos