Associação entre o SNP IL-17A -197 G/A (rs2275913) e a susceptibilidade à leishmaniose tegumentar Americana no Estado de Pernambuco, Brasil / Association between SNP IL-17A -197 G / A (rs2275913) and susceptibility to American cutaneous leishmaniasis in the State of Pernambuco, Brazil

A interleucina17 (IL-17) é um mediador da resposta imune contra Leishmania.A associação de SNPs no IL-17 com desordens imunológicas e doenças infecciosas já foi demonstrada. No entanto, nenhuma associação de variantes do IL-17 com a leishmaniose tegumentar Americana (LTA) foi ainda descrita. Este estudo avaliou a associação do SNP IL-17 -197 G/A rs2275913 com a susceptibilidade à infecção por Leishmania braziliensis, em indivíduos de regiões endêmicas do Estado de Pernambuco, Brasil. Pessoas de municípios do Estado foram diagnosticadas quanto à infecção por L. (V.) braziliensis, e agrupadas como sintomáticos (gS, casos), assintomáticos (gA, controles) e sem infecção (gSI). As freqüências genotípicas foram determinadas e o equilíbrio de Hardy-Weinberg (EqHW) foi avaliado. A associaçãodo rs2275913 com a doença (casos) foi medida por Odds ratio (OR). As cargas parasitárias (cp) foram comparadas entre gS e gA, e entre os genótipos. A frequência de células IL-17+ e concentração de Il-17 secretada foram avaliadas por citometria de fluxo, e correlacionadas com a carga parasitária. 365 indivíduos foram inclusos no estudo de associação: 186 compuseram um grupo sem infecção, 88 foram considerados gS (casos) e 91 gA (controles). O alelo raro A foi encontrado em 45 gA, e 45 gS. O estudo de associação tipo caso-controle mostrou ausência de associação (OR=1,27; IC: 0,70-2,33; p= 0,424) de portadores do alelo A com a susceptibilidade à LTA, frente à infecção por L. braziliensis. Maiores frequências de células CD4+ IL-17+ alternativas e patogênicas foram observadas entre portadores do alelo A (AA/AG x GG: p=0,018; p=0,018, respectivamente). A correlação de frequências de células IL-17+ IFNγ+ e IFNγ- com as cps de pacientes expostos à infecção mostrou relação significativa de Th17 patogênicas (IFNγ+) (p=0,043; r2=0,347) com a eliminação de parasitas. Dentro dos critérios estatísticos estabelecidos, O SNP IL-17 -197 G/A não tem associação suficiente para ser sugerido como um marcador de susceptibilidade ao desenvolvimento de doença frente à infecção por L. braziliensis, embora os resultados obtidos confirmem a capacidade deste SNP em alterar significativamente a quantidade de citocina expressa. O conjunto de resultados obtidos demonstra que a quantidade de IL-17 não exerce influência aparente sobre as cargas parasitárias dos indivíduos expostos à infecção, sugerindo que sua função neste aspecto seria relacionada ao estímulo da secreção de IFNγ, e à proporção de células Th17 IFNγ+ diferenciadas em resposta à infecção. Este estudo acrescenta conhecimento sobre a influência de uma importante variação genética em IL-17 sobre a LTA, e pode contribuir para reforçar o papel da IL-17 na patogênese da LTA.

Otimização de ferramentas moleculares baseadas em multiplex PCR para inclusão de controles de qualidade amostral no diagnóstico das leishmanioses / Development of molecular tools multiplex PCR-based for the inclusion of sample quality controls in the diagnosis of leishmaniasis

A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura. A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p< 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p<0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses.

Otimização de ferramentas moleculares baseadas em multiplex PCR para inclusão de controles de qualidade amostral no diagnóstico das leishmanioses / Development of molecular tools multiplex PCR-based for the inclusion of sample quality controls in the diagnosis of leishmaniasis

A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura

A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p< 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p<0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses (AU)

Otimização de ferramentas moleculares baseadas em multiplex PCR para inclusão de controles de qualidade amostral no diagnóstico das leishmanioses / Development of molecular tools multiplex PCR-based for the inclusion of sample quality controls in the diagnosis of leishmaniasis

A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura

A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p < 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p < 0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses