Age-associated changes in alpha-methyl CoA racemase (AMACR) expression in nonneoplastic prostatic tissues.

Alpha-methyl CoA racemase (AMACR) is overexpressed in several human cancers, most notably colon and prostate. AMACR expression in the prostate has been investigated primarily in patients, in an older age group, treated for prostatic carcinoma and benign prostatic hypertrophy. No studies have assessed the age distribution of AMACR expression in normal men. Archival paraffin-embedded prostate tissue from 41 organ donor men (age range, 13-63 years) with no evidence of prostate neoplasia was stained with a monoclonal antibody for AMACR. Intensity was graded on a scale of 0 to 3. Semi-quantitative analysis of staining in acinar cells was used to generate a composite score (CS) [Sigma(% area x intensity)] for each case. Nondonor cases with foci of prostate cancer and high-grade prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) were used as external positive controls for AMACR. These sections were also stained for Ki-67, to assess proliferative index. The 41 cases encompassed different age groups (13-20 years, N = 11; 20-45 years, N = 17; >45 years, N = 13). Acinar cells showed granular cytoplasmic staining. Focal positive staining was also seen in the prostatic urethra and the periurethral glands. There was wide variation in the level of expression within each age group. The level of expression seen in subjects younger than 45 years was higher (mean CS = 41.3; median CS = 22.5) than that seen in subjects older than 45 years (mean CS = 8.8; median CS = 9.0) with a P value of 0.01. Most cases in the control set of prostatic adenocarcinoma cases showed moderate to strong staining. A negative correlation was seen evaluating CS and age in subjects 20 years of age and older (r = -0.47). Ki-67 staining was variable. 1) AMACR expression can be seen in benign prostatic glandular epithelium, across all age groups. However, it is age-related, with significantly lower expression in subjects younger than 45 years. This could account for the negative staining reported in benign glands, due to biased sampling of the older population. 2) Focal positive staining is seen in the prostatic urethra and periurethral glands in 71% of the cases, with no age correlation. This is of concern because this epithelium could potentially be misinterpreted as foci of PIN. 3) The low expression of AMACR in benign glands in the older age group makes this marker useful in detecting malignancy. However, AMACR staining should be interpreted with caution and the diagnosis of PIN or prostate cancer should be rendered only with convincing histologic evidence. 4) Ki-67 staining was very variable and showed no correlation with age and AMACR expression levels. AMACR expression had no correlation with proliferative index.

Modulation of trophoblast function by tumor necrosis factor-alpha: a role in pregnancy establishment and maintenance?

OBJECTIVE: Trophoblast differentiation is a critical process for successful implantation and establishment of the human placenta. The aim of this study was to characterize the effect of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interleukin-6 (IL-6) on the expression of markers of trophoblast function and differentiation. STUDY DESIGN: Human cytotrophoblasts were stimulated with 1 and 10 ng/mL recombinant TNF-alpha or IL-6. Cell viability was determined and conditioned culture media was analyzed by gelatin zymography to assess protease secretion and by enzyme-linked immunosorbent assays to measure production of beta-human chorionic gonadotropin and oncofetal fibronectin. RESULTS: TNF-alpha increased secretion of urokinase-type plasminogen activator up to 3-fold of basal unstimulated production. Stimulation of cytotrophoblasts with this cytokine also inhibited beta-human chorionic gonadotropin secretion up to 75%. TNF-alpha did not modify the secretion of matrix metalloproteinase-9 and oncofetal fibronectin. IL-6 had no effect on these trophoblast differentiation markers. CONCLUSION: These results show that TNF-alpha stimulated cytotrophoblasts modulate the expression of differentiation markers, down-regulating the autocrine signals that promote syncytialization, and increasing their invasive capacity through up-regulation of proteases. We suggest that this regulatory mechanism of trophoblast function could play an important role during trophoblast implantation, in pregnancy failure and in the normal and pathologic rupture of fetal membranes.

Phospolipase A2 and premature rupture of membranes

Antecedentes: La actividad de fosfolipasa A2 (FLA2) ha sido relacionada con el incremento en los niveles de prostaglandina E2 (PGE2) en el líquido amniótico (LA). Altas concentraciones de este compuesto se encuentran en el LA en las siguientes condiciones: trabajo de parto, infección y ruptura prematura de membrana (RPM). Sin embargo la asociación entre este incremento y la FLA2 nunca ha sido demostrada. Objetivo: Estudiar la asociación entre la actividad FLA2 y la patogénesis de la RPM. Material y métodos: Se analizó la actividad de esta enzima en 3 grupos de LA: 1-Seguno trimestre 16-22 semanas de gestación (SG), 2- término 36-40 SG y 3- Ruptura Prematura de Membranas 28-36 SG, con y sin presencia de infección. Resultados: La actividad de FLA2 en los LA de segundo trimestre fue de 1.782 ñ 1.31 nanomolos de Fosfatidil-Colina degradada/mg proteína, mientras de RPM no infectadas tuvieron valores de 12.357 ñ 5.96 nm/mg y las infectadas de 29.077 ñ 17.91 nm/mg. Se estableció diferencias significativas entre las muestras de segundo trimestre y todos los demás grupos (p< 0.0001), entre RPM infectada y todos los grupos (p< 0.0001); y no se encontró diferencia entre los LA de término y de RPM no infectados. Discusión: Sugerimos la participación de la Fosfolipasa A2 en el mecanismo fisiológico de trabajo de parto y en el mecanismo patogénico de la RPM

Caracterización de un modelo in vitro para el estudio de las propiedades invasivas del trofoblasto / Characterization of an in vitro model of the invasive properties of the trophoblast

Se analizó la probable utilidad del cultivo de biopsias de vellosidades coriales humanas del primer trimestre, como un modelo de estudio de las propiedades invasivas del trofoblasto. Para definir el evento desde el punto de vista bioquímico, se buscaron diferentes marcadores del fenómeno que incluyó la identificación de actividades enzimáticas que permiten el fenómeno invasivo. Fue posible demostrar que las células derivadas del cultivo de las biopsias liberan activamente al medio de cultivo proteasas neutras dentro de las que se identificó con ensayos específicos a colagenasa y gelatinasa. También fue posible identificar, usando una técnica de gel/sustrato, a otras proteasas que no han sido caracterizadas. La expresión de todas estas enzimas, dirigidas contra componentes de la matriz extracelular uterina, permite el uso de este modelo para estudiar los mecanismos de regulación de su síntesis y actividad, y así, caracterizar desde el punto de vista molecular el evento invasivo.

Participación de las metaloproteasas de matriz extracelular en la ruputora prematura de membranas fetales: un modelo fisiopatogénico novedoso / Participation of metaloproteases of extracellular matrix in premature rupture of fetal membranes: a pyisiopathogenic model

Se aportan pruebas experimentales que involucran la participación de la familia de las metaloproteinasas de matriz extracelular en la génesis de la ruptura prematura de membranas. La expresión de este grupo de enzimas, que se presenta en condiciones normales durante el trabajo de parto aparecen en la RPM sin relación con la edad gestacional. Este fenómeno no se presenta como un ejemplo aislado de la participación de las metaloproteinasas en eventos ligados al trabajo de parto, ya que es bien conocida su participación en la maduración del cuello uterino que precede a la expulsión del producto, y que consiste en mecanismos semejantes a los que ahora se postulan para la maduración de las membranas fetales. La hipótesis de trabajo en condiciones patológicas, implica entoces la activación de un sistema normal en un momento inadecuado que resulta en ruptura prematura de membranas.