Development of an effective and rapid qPCR for identifying human ChREBPα/ß isoforms in hepatic and adipose tissues.

Most quantitative real-time PCR (qPCR) detection methods use two types of chemistries to measure the expression levels of ChREBP isoforms, hydrolysis probes for ChREBPα and SYBR Green for ChREBPß. Hydrolysis probes are not available to determine the ChREBPß isoform. The aim of this study was to develop a qPCR assay based only on hydrolysis probes for both ChREBP isoforms. Liver and adipose tissue biopsies from patients undergoing elective cholecystectomy surgery were used to perform qPCR. To validate this assay, the results were compared with sequencing and High Resolution Melting (HRM) PCR assays. Direct sequencing was used to determine the sequence showing site where ChREBPß presents its specific splicing (1 b exon/2 exon) in order to design the primers and the probe. We developed a qPCR assay to determine the ChREBP isoforms expression based on hydrolysis probes. It assays showed good efficiency (95.50%, on average), high reproducibility, and a strong linear correlation (R2 ≥ 0.99) for tissues tested. HRM analysis confirmed the specificity of the primers and the result of this assay matched (100%) with the outcomes obtained by sequencing and qPCR. Also, we obtained the ChREBPß sequence showing exon 1b spliced to exon 2, bypassing exon 1a, and retaining the remainder of the ChREBPα exons. Based on the use of hydrolysis probes, our method can efficiently identify the expression of both ChREBP isoforms. Thus, the comparability of the qPCR results using a single chemistry (hydrolysis probes) to discriminate between both ChREBP isoforms was possible.

Técnica quirúrgica antifuga en el implante de catéter de Tenckhoff para diálisis peritoneal / Antileaking surgical technique in implantation of Tenckhoff's catheter for peritonal dialisis

Se realizó un estudio experimental, prospectivo, comparativo, de selección aleatoria y ciego en los Hospitales Nuevo Civil y México Americano de Guadalajara, de enero a diciembre de 1994, en que se analizaron dos procedimientos utilizados para disminuir hiperazoemia en pacientes con insuficiencia renal crónica o aguda, con la finalidad de establecer eficiencia obtenida mediante la aplicación de catéteres de diálisis peritoneal rectos y curvos a la cavidad peritoneal. En ambas técnicas se fijo firmemente el catéter a la aponeurosis peritoneal o posterior del músculo recto anterior del abdomen. Distribuimos 90 pacientes en dos grupos de 45, para comparar la técnica quirúrgica original de colocación de catéter de diálisis frente a una técnica que denominamos "antifuga". El objetivo principal es demostrar que utilizando la técnica antifuga y clasificando la consistencia de la aponeurosis posterior del músculo recto anterior del abdomen (APRA) y utilizando el grosor de la sutura según su firmeza, pudiera existir un menor número de fugas, infecciones del túnel subcutáneo e infección en el sitio de salida de la pared abdominal, además de disminuir otras complicaciones secundarias, como son: dehiscencia, herniación e infección de la herida quirúrgica. Con base a los resultados de este estudio experimental concluimos que existe correlación entre la fuga temprana de soluciones con la técnica original y con la edad, grado de obesidad y APRA de los pacientes. Además, que el de catéteres en espiral fallan que menor frecuencia que los rectos, por lo que recomendamos la técnica antifuga y el empleo de catéteres en espiral en el manejo de diálisis peritoneal ambulatoria para pacientes con insuficiencia renal crónica