Determinação dos níveis de dextrometorfano e dextrorfano em saliva humana para avaliação fenotípica de CYP2D6 / Determination of dextromethorphan and dextrorphan levels in human saliva for phenotypic evaluation of CYP2D6

A CYP2D6 é uma enzima metabólica e sua atividade varia entre indivíduos em função de fatores genéticos, ambientais, presença de doenças e/ou comedicações. A fenotipagem de CYP2D6 com dextrometorfano (DXM) é uma abordagem útil para a determinação da atividade metabólica individual de CYP2D6 e seu procedimento envolve o uso de um método analítico adequado. O uso de matrizes alternativas como a saliva pode tornar a fenotipagem mais simples, e favorecer sua aplicação na rotina clínica. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar um método analítico em CL-EM/EM para a quantificação de DXM e dextrorfano (DTF) em saliva humana. Foi necessária uma alíquota de 200 μl de amostras de saliva, processadas utilizando-se a precipitação de proteínas com metanol. (...) Os valores de razão metabólica (RM DXM/DTF) foram calculados individualmente para a classificação fenotípica e variaram de 4 a 383, sendo todas as pacientes classificadas como metabolizadoras extensivas. O presente método é adequado para a quantificação de DTF e DXM em saliva e pode ser aplicado na rotina clínica para a fenotipagem de CYP2D6. (AU)

CYP2D6 is a metabolic enzyme and its activity varies according to factors like environment, genetic, drug interactions and disease determinants. CYP2D6 phenotyping with dextromethorphan (DXM) is a useful approach to determine an individual metabolic activity and its procedure involves the use of an appropriate analytical method. The use of alternative matrices such as saliva can make phenotyping simpler, and favor its application in the clinical routine. The aim of this study was to develop and validate an analytical method in LC-MS/MS for DXM and dextrorphan (DX) quantification in human saliva. Aliquots of 200 μl of saliva were required for analysis and samples were processed with methanol for protein precipitation. (...) The metabolic ratio (MR DXM/DX) values were individually calculated for phenotype classification and ranged from 4 to 383, all patients being classified as extensive metabolizers. The present method is suitable for the quantification of DX and DXM in saliva and may be applied in clinical routine for CYP2D6 phenotyping. (AU)

Determinação dos níveis de dextrometorfano e dextrorfano em saliva humana para avaliação fenotípica de CYP2D6 / Determination of dextromethorphan and dextrorphan levels in human saliva for phenotypic evaluation of CYP2D6

A CYP2D6 é uma enzima metabólica e sua atividade varia entre indivíduos em função de fatores genéticos, ambientais, presença de doenças e/ou comedicações. A fenotipagem de CYP2D6 com dextrometorfano (DXM) é uma abordagem útil para a determinação da atividade metabólica individual de CYP2D6 e seu procedimento envolve o uso de um método analítico adequado. O uso de matrizes alternativas como a saliva pode tornar a fenotipagem mais simples, e favorecer sua aplicação na rotina clínica. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar um método analítico em CL-EM/EM para a quantificação de DXM e dextrorfano (DTF) em saliva humana. Foi necessária uma alíquota de 200 µl de amostras de saliva, processadas utilizando-se a precipitação de proteínas com metanol. O método utilizou uma coluna Zorbax Eclipse fenil XDB (150 x 4,6 mm; 5 µm) e fase móvel constituída de tampão formiato de amônio 10 mM e acetonitrila, ambos acididificados com 0,1% de ácido fórmico, nas proporções de 65:35 (v:v) e fluxo de 1 ml/min. Os compostos foram eluídos em sistema de eluição isocrático, com tempos de retenção de 2,6 min (DTF) , 3,6 min (padrão interno) e 5 min (DXM). O método mostrou ser preciso (CV% ≤ 7,5), exato (EPR%: -13,6 a +8,8), e linear (r≥ 0,997) nas faixas de concentração de 1-100 ng/ml para DTF e de 5-1000 ng/ml para DXM. Adicionalmente, nenhum efeito matriz (CV% ≤ 11,8) ou questões relacionadas à estabilidade dos compostos foram observados para todas as condições testadas. A aplicação do método foi demonstrada através da determinação de DTF e DXM em 53 amostras de saliva de mulheres com câncer de mama em tratamento com tamoxifeno. Foi administrada uma dose de 30 mg de DXM e amostras de saliva foram coletadas 4 h após a dose. As concentrações salivares variaram de 12,3 a 3232 ng/ml para o DXM e de < 1 a 19,9 ng/ml para o DTF. Os valores de razão metabólica (RM DXM/DTF) foram calculados individualmente para a classificação fenotípica e variaram de 4 a 383, sendo todas as pacientes classificadas como metabolizadoras extensivas. O presente método é adequado para a quantificação de DTF e DXM em saliva e pode ser aplicado na rotina clínica para a fenotipagem de CYP2D6.