Does corneal epithelial thickness show the severity of psoriasis? SD-OCT study

Abstract Background Previous studies have generally focused on dry eye test abnormalities and ocular involvements such as uveitis, and blepharitis in psoriasis. Psoriasis area severity ındex (PASI), which is used to assess psoriasis severity, is a time-consuming and complex tool. Objective To evaluate the relationship between disease severity and central corneal epithelial thickness (CCET) in psoriasis. Methods 175 eyes of 175 psoriasis patients and 57 eyes of 57 healthy individuals as a control group was included in this study. Psoriasis patients were divided into three subgroups according to PASI score as < 10 mild, 10‒20 moderate and > 20 severe. CCET was measured by spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT), and mean values were recorded. Mean CCET values were compared between the psoriasis groups and the control group. Additionally, the relationship between PASI score and CCET was examined. Results The mean CCET value was 58.06 ± 3.1 μm in the mild group, 60.10 ± 5.0 μm in the moderate group, 65.75 ± 6.3 μm in the severe group and 56.16 ± 3.1 μm in the control group. It was determined that the mean CCET value was significantly higher in all psoriasis groups compared to the control group (p < 0.001). The mean CCET value was significantly higher in the moderate psoriasis group than in the mild psoriasis group (p = 0.018), and in the severe psoriasis group compared to the moderate psoriasis group (p < 0.001). There was a strong positive correlation between PASI score and CCET (p < 0.001, r = 0.519). Study limitations Cross-sectional design and a relatively small number of participants. Conclusions There is a strong positive correlation between psoriasis severity and CCET. Contactless measurement of CCET by SD-OCT can be an indicator of psoriasis severity.

Dynamic changes in and time sequence of ultraviolet B-induced apoptosis in rat corneal epithelial cells / Alterações dinâmicas na sequência temporal da apoptose induzida por radiação ultravioleta B em células epiteliais da córnea de ratos

ABSTRACT Purpose: To systematically examine the dynamic changes and time sequence in corneal epithelial cell apoptosis after excessive ultraviolet B irradiation. Methods: Ultraviolet B (144 mJ/cm2) was used to irradiate rat corneal epithelial cells for 2 h. Cell morphology was observed on differential interference contrast microscopy, and the numbers of the different kinds of apoptotic cells were counted using the ImageJ software. Cell viability was measured with the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5- diphenyl-2-H-tetrazolium bromide method. Cell apoptotic rate and loss of mitochondrial membrane potential were detected using flow cytometric analyses. The expression levels of 3 apoptotic genes were measured with real-time quantitative polymerase chain reaction at different time points within 0-24 h after irradiation. Results: After 144-mJ/cm2 ultraviolet B irradiation for 2 h, the expression levels of caspase-8 and Bax were highest at 0 h; furthermore, the mitochondrial membrane potential decreased at 0 h and remained constant for 6 h in a subsequent culture. At 6 h, caspase-3 was activated. The decrease in cell viability and increase in apoptotic rate peaked at 6 h. The caspase-3 expression level decreased within 12-24 h, which led to a decline in apoptotic rate and change in apoptotic stage. Conclusions: The corneal epithelial cells exhibited rapid apoptosis after ultraviolet B irradiation, which was associated with both extrinsic and intrinsic pathways.

RESUMO Objetivos: Explorar sistematicamente as mudanças dinâmicas e a sequência temporal no processo de apoptose de células epiteliais corneanas após excesso de irradiação com ultravioleta B. Métodos: A radiação ultravioleta B (144 mJ/cm2) foi utilizada para irradiar células epiteliais da córnea de rato durante 2h. A morfologia celular foi observada por meio de microscópio de contraste de interferência diferencial, e os números de diferentes tipos de células apoptóticas foram contados e registrados pelo software ImageJ. A viabilidade celular foi medida pelo método brometo de 3- (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2-H-tetrazólio. A taxa apoptótica celular e a perda do potencial da membrana mitocondrial foram detectadas por meio de análises citométricas de fluxo. Os níveis de expressão de três genes apoptóticos foram medidos por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real em diferentes momentos dentro de 0-24 h após a irradiação. Resultados: Após 144 mJ/cm2 de irradiação com ultravioleta B por 2h, os níveis de expressão de caspase-8 e Bax foram maiores em 0h; o potencial da membrana mitocondrial diminuiu a 0h e permaneceu constante por 6h na cultura subsequente. Às 6h, a caspase-3 foi ativada. A diminuição da viabilidade celular e o aumento da taxa apoptótica atingiu o pico em 6h. A expressão de caspase-3 diminuiu dentro de 12 - 24 h, levando a um declínio na taxa apoptótica e alteração no estágio apoptótico. Conclusões: As células epiteliais da córnea apresentaram uma apoptose rápida após excesso de irradiação com ultravioleta B, e esse processo foi associado tanto à via extrínseca como à via intrínseca.

Evaluation of the impact of subepithelial corneal infiltrates on corneal biomechanics after epidemic keratoconjunctivitis / Avaliação do impacto de infiltrados sub-epiteliais corneanos na biomecânica corneana após ceratoconjuntivite epidêmica

ABSTRACT Purpose: To examine the effect of subepithelial corneal infiltrates on corneal biomechanical properties after epidemic keratoconjunctivitis compared to that in healthy controls. Methods: The cross-sectional study included consecutive patients with bilateral subepithelial corneal infiltrates after epidemic keratoconjunctivitis and healthy controls. Best corrected visual acuity corneal subepithelial infiltrate scoring Fantes grading scale, and central corneal thickness were measured. Corneal hysteresis corneal resistance factor Goldmann correlated intraocular pressure and corneal compensated intraocular pressure were assessed using an ocular response analyzer. Results: This study included 66 eyes of 33 patients with subepithelial corneal infiltrates following epidemic keratoconjunctivitis and randomly selected 37 eyes of 37 healthy volunteers. The mean Fantes and CSIS scores were 1.8 ± 0.8 and 2.9 ± 1.3, respectively, in the first involved eyes and 1.3 ± 1.1 and 1.9 ± 1.7, respectively, in the fellow eyes (p=0.009 and p=0.002, respectively). The first (526.1 ± 28.1 µm; p=0.005) and second involved eyes (523.4 ± 38.1 µm; p=0.044) had significantly thinner corneas compared to that in healthy controls (557.0 ± 38.1 µm). While best-corrected visual acuity showed a positive correlation with corneal resistance factor (r=0.363, p=0.045) and corneal hysteresis (r=0.414, p=0.021), corneal subepithelial infiltrate scoring showed a negative correlation with Goldmann correlated intraocular pressure (r=-0.479, p=0.006) and corneal compensated intraocular pressure (r=-0.413, p=0.021). Conclusion: Eyes with subepithelial corneal infiltrates had significantly thinner corneas compared to that in healthy controls. A positive correlation of the corneal resistance factor and corneal hysteresis with best-corrected visual acuity and a negative correlation of the Goldmann correlated intraocular pressure and corneal compensated intraocular pressure with corneal subepithelial infiltrate scoring should be taken into account when measuring intraocular pressure values in patients with subepithelial corneal infiltrates.

RESUMO Objetivo: Examinar o efeito de infiltrados sub-epiteliais corneanos nas propriedades biomecânicas da córnea após ceratoconjuntivite epidêmica, em comparação com controles saudáveis. Métodos: Este estudo transversal incluiu pacientes consecutivos com infiltrados sub-epiteliais corneanos bilaterais após ceratoconjuntivite epidêmica e controles saudáveis. Foram medidas a melhor acuidade visual corrigida, uma pontuação do infiltrado sub-epitelial da córnea, a escala de graduação de Fantes e a espessura central da córnea. A histerese da córnea, o fator de resistência da córnea, a pressão intraocular correlacionada à tonometria de Goldmann e a pressão intraocular compensada da córnea foram avaliados com o Ocular Response Analyzer. Resultados: Este estudo incluiu 66 olhos de 33 pacientes com infiltrados corneanos sub-epiteliais após ceratoconjuntivite epidêmica e selecionou aleatoriamente 37 olhos de 37 voluntários saudáveis. As pontuações médias da escala de Fantes e dos infiltrados sub-epiteliais corneanos nos primeiros olhos acometidos foram respectivamente de 1,8 ± 0,8 e 2,9 ± 1,3. Nos olhos contralaterais, foram respectivamente de 1,3 ± 1,1 e 1,9 ± 1,7 (p=0,009 e p=0,002, respectivamente). O primeiro e o segundo olhos envolvidos tinham córneas significativamente mais finas (respectivamente 526,1 ± 28,1 µm; p=0,005 e 523,4 ± 38,1 µm; p=0,044) em comparação com os controles saudáveis (557,0 ± 38,1 µm). Embora a acuidade visual melhor corrigida tenha mostrado uma correlação positiva com o fator de resistência da córnea (r=0,363, p=0,045) e com a histerese da córnea (r=0,414, p=0,021), a pontuação dos infiltrados sub-epiteliais corneanos mostrou uma correlação negativa com a pressão intraocular correlacionada à tonometria de Goldmann (r=-0,479, p=0,006) e com a pressão intraocular compensada da córnea (r=-0,413, p=0,021). Conclusão: Os olhos com infiltrados corneanos sub-epiteliais tinham córneas significativamente mais finas em comparação com os controles saudáveis. Ao se medirem os valores de pressão intraocular em pacientes com infiltrados sub-epiteliais corneanos, deve-se levar em consideração tanto as correlações positivas do fator de resistência da córnea e da histerese da córnea com a melhor acuidade visual corrigida quanto as correlações negativas da pressão intraocular correlacionada à tonometria de Goldmann e da pressão intraocular compensada da córnea com a pontuação do infiltrado sub-epitelial da córnea.

Severe corneal burn due to the accidental application of salicylic acid packed in a plastic dropper bottle / Quemadura corneal grave debida a la aplicación accidental de ácido salicílico envasado en un frasco gotero plástico

Eye burns due to the accidental application of pharmacological or nonpharmacological substances packaged in plastic dropper bottles have been described for more than three decades and continue to occur. These burns can cause potentially serious corneal injuries. We report the case of a patient who mistakenly applied salicylic acid to the right eye after confusing it with an eye lubricant, which caused him a severe corneal burn. Fortunately, after aggressive medical and surgical management (including oxygen therapy and amniotic membrane grafting), the visual results were good. We suggest conducting educational campaigns and taking legislative measures in our country to avoid packaging corrosive substances in this type of dropper bottle to reduce the risk of accidental burns.

Las quemaduras oculares por aplicación accidental de sustancias farmacológicas o no farmacológicas envasadas en frascos goteros plásticos, se han descrito desde hace más de tres décadas y siguen ocurriendo. Estas quemaduras pueden causar lesiones potencialmente graves de la córnea. Se presenta el caso de un paciente que se aplicó ácido salicílico en el ojo derecho al confundir el envase con el de un lubricante ocular, lo que le causó una grave quemadura corneal. Afortunadamente, tras un manejo médico y quirúrgico agresivo (incluida oxigenoterapia e injerto de membrana amniótica) los resultados visuales fueron buenos. Se sugiere hacer campañas educativas y adoptar normas en el país para evitar el envase de sustancias corrosivas en este tipo de frascos goteros, con el fin de disminuir el riesgo de quemaduras accidentales.

Effect of the bioprotectant agent trehalose on corneal epithelial healing after corneal cross-linking for keratoconus / Efeito do agente bioprotetor trealose na cicatrização epitelial da córnea após reticulação corneana para ceratocone

ABSTRACT Purpose: This study aimed to compare the effectiveness of eye drops containing a combination of sodium hyaluronate and trehalose and sodium hyaluronate for the treatment of corneal cross-linking and epithelial healing. Methods: This study included 46 eyes of 23 keratoconus patients who underwent corneal cross-linking on both eyes. Unpreserved trehalose 30 mg/mL and sodium hyaluronate 1.5 mg/mL (Thealoz Duo®; Thea, France) were applied six times a day on one eye of each patient and unpreserved sodium hyaluronate 0.15% (Eye Still®; Teka, Inc., Istanbul) was applied on the other eye. Patients were examined daily until complete re-epithelialization. Postoperative examinations to assess the measured size of epithelial defect were performed using slit-lamp biomicroscopy. Results: The study included 23 patients (13 females and 10 males) with a mean age of 20.9 ± 10.3 years. Corneal epithelial healing time after cross-linking was 2.3 ± 1.2 days for the trehalose and sodium hyaluronate group and 3.8 ± 2.9 days for the sodium hyaluronate group (p=0.03). Conclusion: The application of eye drops containing the combination of trehalose and sodium hyaluronate resulted in faster corneal re-epithelialization following corneal cross-linking than that of eye drops containing sodium hyaluronate alone.

RESUMO Objetivo: Este estudo teve como objetivo comparar a eficácia de colírios contendo uma combinação de hialurônico de sódio e hialuronato de sódio e trealose para o tratamento da cicatrização epitelial em pacientes com cross-linking corneano. Métodos: Este estudo inclui 46 olhos de 23 pacientes com ceratocone, que foram operados com cross-linking corneano em ambos os olhos. Trealose não preservada 30 mg/mL e hialuronato de sódio 1,5 mg/mL (Thealoz Duo®; Thea, França) foram aplicados seis vezes por dia em um olho de cada paciente e hialuronato de sódio não conservado, 0,15% (Eye Still®; Teka, Inc., Istambul) foi aplicada no outro olho. Os pacientes foram examinados diariamente até a completa reepitelização. Exames pós-operatórios para avaliar o tamanho medido do defeito epitelial foram realizados usando biomicroscopia com lâmpada de fenda. Resultados: O estudo incluiu 23 pacientes (13 mulheres e 10 homens) com idade média de 20,9 ± 10,3. O tempo de cicatrização epitelial da córnea após o cross-linking foi de 2,3 ± 1,2 dias para o grupo trealose e hialuronato de sódio e 3,8 ± 2,9 dias para o grupo hialurônico de sódio (p=0,03). Conclusão: A aplicação de gotas para os olhos contendo combinação de trealose e hialuronato de sódio resultou em uma re-epitelização da córnea mais rápida após o cross-linking corneano do que a de gotas contendo hialurônico de sódio apenas.

A supramolecular look at microenvironmental regulation of limbal epithelial stem cells and the differentiation of their progeny / Uma visão supramolecular sobre a regulação microambiental de células tronco epiteliais limbais e a diferenciação de sua progênie

ABSTRACT Various approaches have been taken to improve our knowledge of the microenvironmental regulation of limbal epithelial stem cells. Researchers have extensively investigated the roles of growth factors, survival factors, cytokines, enzymes, and permeable molecules secreted by the limbal cells. However, recent evidence suggests that stem cell fate (i.e., self-renewal or differentiation) can also be influenced by biophysical and mechanical cues related to the supramolecular organization and the liquid crystalline (mesophase) nature of the stromal extracellular matrix. These cues can be sensed by stem cells and transduced into intracellular biochemical and functional responses, a process known as mechanotransduction. The objective of this review is to offer perspectives on the supramolecular microenvironmental regulation of limbal epithelial stem cells and the differentiation of their progeny.

RESUMO Muitas abordagens têm sido utilizadas para ampliar entendimentos sobre a regulação microambiental das células tronco epiteliais limbais. Neste contexto, pesquisadores têm exaustivamente investigado a participação de fatores de crescimento, fatores de sobrevida, citocinas, enzimas e moléculas permeáveis secretadas pelas células limbais. Entretanto, evidências recentes sugerem que o destino (ie. autorrenovação ou recrutamento para a via de diferenciação) das células tronco também sofre influência de estímulos biofísicos ou mecânicos relacionados à organização supramolecular e à natureza liquido-cristalina (mesofases) da matriz extracelular estromal. Esses estímulos podem ser percebidos e traduzidos pelas células tronco em sinais bioquímicos que geram respostas funcionais, através de um processo designado de mecanotransdução. Objetiva-se, com a presente revisão, oferecer ao leitor perspectivas supramoleculares sobre a regulação microambiental das células tronco epiteliais limbais e a diferenciação de sua progênie.

Localized flap melt after Nd-YAG laser treatment in recurrent post-LASIK epithelial ingrowth / Derretimento localizado de flap após o tratamento por Nd-YAG laser para crescimento epitelial recorrente pós-LASIK

ABSTRACTNeodymium: Yttrium-Aluminum-Garnet (Nd-YAG) laser treatment of epithelial ingrowth was found promising with high success rates in cases of primary post-LASIK epithelial ingrowth. However, the application range of this procedure is not well-known. For the first time, the authors report the outcome of a patient treated with Nd-YAG laser for multiple recurrences of post-laser in situ keratomileusis epithelial ingrowth.

RESUMOO tratamento com laser de neodímio: Ítrio-Alumínio-Granada (do inglês, Nd-YAG Laser) para o crescimento epitelial primário pós-LASIK demonstrou altas taxas de sucesso. No entanto, os limites deste procedimento não são completamente conhecidos. Pela primeira vez, os autores relatam os resultados de um olho tratado com Nd-YAG laser para múltiplo crescimento epitelial pós-LASIK recorrente que desenvolveu um derretimento localizado do flap.

Tempo de reepitelização corneana com a instilação de colírio contendo hialuronato de sódio e carboximetilcelulose / Corneal reepithelialization time with instillation of eye drops containing sodium hyaluronate and carboxymethylcellulose

OBJETIVO: Avaliar o tempo de reepitelização corneana pós abrasão usando colírios comercialmente disponíveis, um contendo hialuronato de sódio a 0,4%, outro contendo carboximetilcelulose a 1%, e comparar com a reepitelização sem instilação de colírio. MÉTODOS: Foram utilizados 24 coelhos, nos quais foi feita a abrasão mecânica da córnea nos 8 mm centrais. Esses animais foram divididos em três grupos. O primeiro grupo recebeu um colírio disponível comercialmente contendo hialuronato de sódio 0,4%, o segundo recebeu um colírio contendo carboximetilcelulose 1% e o terceiro não recebeu nenhuma droga. A avaliação foi feita a cada 24 horas por meio da análise de fotografias digitais sob luz azul de cobalto e coramento das córneas com fluoresceína a 2%. O estudo das imagens foi feito pelo sistema de análise de imagens do Autocad 2009®. A análise dos dados foi feita comparando o tempo total de reepitelização da córnea e a cada 24 horas entre os três grupos. RESULTADOS: A velocidade de reepitelização do grupo que usou colírio contendo hialuronato de sódio foi em média 90 horas; o grupo que usou carboximetilcelulose apresentou média de 105 horas; e o grupo que não usou nenhum tipo de lubrificante apresentou média de 108 horas para total reepitelização. Houve uma melhor performance na reepitelização após 96 horas nas córneas dos coelhos que usaram os colírios lubrificantes, sendo essa diferença estatisticamente comprovada. CONCLUSÃO: O colírio contendo hialuronato de sódio 0,4% mostrou índice de eficácia maior que aquele contendo carboximetilcelulose 1%, e este maior eficácia que o controle. Os resultados encontrados neste estudo mostram que o uso de lubrificantes no processo de reepitelização são de extrema valia e devem ser usados de rotina na clínica oftalmológica.

PURPOSE: Evaluate the time of post-abrasion corneal re-epithelialization using commercially available eye drops, one of which containing 0.4% sodium hialuronate, and the other containing 1% carboxymethylcellulose, and compare them to the re-epithelialization without the drops. METHODS: 24 rabbits were used, which had the mechanical abrasion of the central 8 mm of their corneas done. These animals were divided in 3 groups. The first one received the drops containing 0.4% of sodium hialuronate, the second one received the drops containing 1% of carboxymethylcellulose and the third group did not receive any drugs. The evaluations took place every 24 hours through the analysis of digital pictures under cobalt blue light and coloring of the corneas with 2% fluorescein. The pictures were analyzed with the software Autocad 2009®. The data was analyzed through the comparison of the total re-epithelialization time among the three groups RESULTS: The time of total re-epithelialization of the group using sodium hialuronate was on average 90 hours and the group using carboxymethylcellulose 105 hours, while the group using no drugs was 108 hours. There was a better performance of those groups using the drops and this difference can be proved statistically. CONCLUSION: The drops containing 0.4% of sodium hialuronate showed a higher efficiency rate compared to the drops containing 1% of carboxymethylcellulose, which was higher than the control group. The results of the present study show that the use of lubricants in the process of re-epithelialization are extremely valid and must be used frequently in ophthalmologic clinic.

Unusual early recurrence of granular dystrophy after deep anterior lamellar keratoplasty: case report / Recorrência atípica e precoce de distrofia granular após transplante lamelar profundo: relato de caso

We report an atypical case of granular corneal dystrophy recurrence after deep anterior lamellar keratoplasty. We describe clinical features, histopathological analysis of the lamellar graft specimen and DNA analysis results. The slit-lamp examination and histopathological findings from the graft specimen indicated the confinement of the typical deposits of granular corneal dystrophy deep in the graft interface area. This localization is atypical, since in most cases recurrences in grafts tend to be initially superficial and situated in the epithelial or subepithelial corneal layers. Molecular genetic analysis revealed an already described mutation and a new intronic variant. The unusual localization and timing of this recurrence of granular corneal dystrophy after deep anterior lamellar keratoplasty suggests that corneal stromal keratocytes may play a role in the formation of granular deposits.

É relatado um caso atípico de recorrência de distrofia corneana granular após transplante lamelar anterior profundo. São descritas as características clínicas, a análise histopatológica do espécime do enxerto lamelar e os resultados de análises de DNA. O exame com lâmpada de fenda e a análise histopatológica do espécime do enxerto demonstram o confinamento dos depósitos típicos da distrofia corneana granular profundamente, na área de interface do enxerto. Esta localização é atípica, uma vez que, na maioria dos casos de recidivas em enxertos, estes tendem a ser no início localizados superficialmente, nas camadas epiteliais ou subepitelial da córnea. A análise genética molecular revelou uma mutação já descrita e uma nova variante intrónica. A localização incomum e o tempo de aparecimento da presente recorrência da distrofia corneana granular após transplante lamelar anterior profundo sugere que ceratócitos do estroma corneano possam desempenhar algum papel na formação dos depósitos granulares.

Effect of corneal epithelium on ultraviolet-A and riboflavin absorption / Efeito do epitélio na absorção corneana de raios ultravioleta-A e riboflavina

PURPOSE: To determine if the corneal epithelium prevents the collagen cross-linking effect. Using immunofluorescence microscopy after CXL, we indirectly analyzed the role of the epithelium as ultraviolet-A (UVA) shield as well as a barrier to riboflavin penetration. METHODS: Fifteen freshly enucleated porcine eyes were divided into 3 groups. The corneal epithelium was kept intact in all groups. Five eyes served as control (Group 1). On group 2, eyes received tetracaine anesthetic drops and topical 0.1 percent riboflavin solution (10 mg riboflavin-5-phosphate in 10 mL 20 percent dextran-T-500). On Group 3, riboflavin was injected into the anterior chamber to allow penetration of the drug through the endothelium. Groups 2 and 3 were exposed to UVA (365 nm, 3 mW/cm²) for 30 minutes. Ultra-thin sections (8 µm) of the corneas were stained with anti-collagen type I and DAPI (4,6-diamidino-2-fenilindole dihydrocloride) and analyzed with fluorescence microscopy. RESULTS: Corneas treated with UVA irradiation and intracameral injection of riboflavin (Group 3) showed greater pattern of collagen organization compared to groups 1 (Control) and 2 (riboflavin and tetracaine eye drops). A yellow stromal staining, which represents the riboflavin diffusion into the stroma, was only observed in eyes injected with riboflavin into the anterior chamber. CONCLUSION: Using immunofluorescence microscopy in porcine corneas, we demonstrated that the corneal epithelium reduces the effectiveness of CXL by preventing the penetration of the drug and not by limiting the UVA transmittance. An inadequate intrastromal concentration of riboflavin may impair CXL effect.

OBJETIVO: Determinar se o epitélio corneano pode impedir ou diminuir o efeito do tratamento com "cross-linking" (CXL). Por meio de microscopia por imunofluorescência, foi indiretamente analisado o efeito do epitélio como escudo aos raios ultravioleta-A (UVA), assim como barreia à penetração da riboflavina. MÉTODOS: Quinze olhos enucleados de porcos foram divididos em 3 grupos. O epitélio corneano foi mantido intacto em todos os grupos. Cinco olhos serviram como controle (Grupo 1). No grupo 2, os olhos foram instilados com colírio anestésico de tetracaína, assim como colírio de riboflavina 0,1 por cento (10 mg de riboflavina-5-fosfato em 10 ml de dextran 20 por cento T-500). No grupo 3, solução de riboflavina foi injetada na câmara anterior para permitir a penetração da droga através do endotélio. Os grupos 2 e 3 foram então expostos à radiação UVA (365 nm, 3 mW/cm²) por 30 minutos. Subsequentemente, cortes ultrafinos (8 µm) das córneas foram marcados com anticolágeno tipo I e DAPI (4,6-diamidino-2-fenilindole dihydrocloride) e analisados com microscópio de imunofluorescência. RESULTADOS: As córneas que receberam injeção intracameral de riboflavina e foram irradiadas com UVA (Grupo 3) mostraram um padrão maior de organização das fibras de colágeno em relação aos grupos 1 (Controle) e 2 (instiladas com colírio anestésico e de riboflavina). Macroscopicamente, a coloração amarelada do estroma, que representa a difusão da riboflavina, foi apenas observada nos olhos que receberam riboflavina intracameral. CONCLUSÃO: Foi demonstrado, através de microscopia por imunofluorescência em córneas de porcos, que o epitélio corneano íntegro diminui a efetividade do CXL por reduzir a penetração da riboflavina, e não por impedir a penetração dos raios UVA. Uma concentração intraestromal inadequada de riboflavina limita o efeito do tratamento.

Gene transfer to primary corneal epithelial cells with an integrating lentiviral vector / Transferência de genes heterólogos para células corneanas epiteliais primárias utilizando vetor lentivírus

PURPOSE: To evaluate the transfer of heterologous genes carrying a Green Fluorescent Protein (GFP) reporter cassette to primary corneal epithelial cells ex vivo. METHODS: Freshly enucleated rabbit corneoscleral tissue was used to obtain corneal epithelial cell suspension via enzymatic digestion. Cells were plated at a density of 5×10³ cells/cm² and allowed to grow for 5 days (to 70-80 percent confluency) prior to transduction. Gene transfer was monitored using fluorescence microscopy and fluorescence activated cell sorter (FACS). We evaluated the transduction efficiency (TE) over time and the dose-response effect of different lentiviral particles. One set of cells were dual sorted by fluorescence activated cell sorter for green fluorescent protein expression as well as Hoechst dye exclusion to evaluate the transduction of potentially corneal epithelial stem cells (side-population phenotypic cells). RESULTS: Green fluorescent protein expressing lentiviral vectors were able to effectively transduce rabbit primary epithelial cells cultured ex vivo. Live cell imaging post-transduction demonstrated GFP-positive cells with normal epithelial cell morphology and growth. The transduction efficiency over time was higher at the 5th post-transduction day (14.1 percent) and tended to stabilize after the 8th day. The number of transduced cells was dose-dependent, and at the highest lentivirus concentrations approached 7 percent. When double sorted by fluorescence activated cell sorter to isolate both green fluorescent protein positive and side population cells, transduced side population cells were identified. CONCLUSIONS: Lentiviral vectors can effectively transfer heterologous genes to primary corneal epithelial cells expanded ex vivo. Genes were stably expressed over time, transferred in a dose-dependence fashion, and could be transferred to mature corneal cells as well as presumable putative stem cells.

OBJETIVO: Avaliar a transferência de genes heterólogos expressando a proteí­na "Green Fluorescent Protein" (GFP) para células corneanas epiteliais primárias ex vivo utilizando vetor lentivírus. MÉTODOS: Tecido corneoescleral de coelhos foi usado para obtenção de suspensão de células corneanas epitelias. As células foram semeadas na densidade de 5×10³ células/cm² e expandidas por 5 dias até uma confluência de 70-80 por cento antes de serem transduzidas. A transferência genética foi monitorada por microscopia fluorescente e por um separador de células ativadas por fluorescência. Foram avaliadas a eficiência de transdução ao longo do tempo e o efeito dose-resposta de diferentes quantidades de partículas virais. Um grupo de células foi analisado pelo separador de células ativadas por fluorescência para avaliar a transdução de células com fenótipo de cé­lulas tronco do epitélio corneano (baseado na exclusão do corante "Hoechst dye"). RESULTADOS: Os vetores lentivírus foram efetivos na transdução de cé­lulas corneanas epiteliais primárias de coelhos ex vivo. Fotodocumentação das células vivas demonstrou células epiteliais de morfologia normal e expressando o gene fluorescente (GFP). A eficiência de transdução ao longo do tempo foi maior no quinto dia após a transdução (14,1 por cento) e demonstrou uma tendência à estabilidade a partir do oitavo dia após a transdução. O número de células transduzidas foi dose-dependente e atingiu 7 por cento com as maiores concentrações de partículas virais. Quando analisadas pelo separador de células ativadas por fluorescência para detecção de células transduzidas e também de células que excluíram o corante "Hoechst dye", foi detectado que células com fenótipo de células tronco do epitélio corneano ("side-population") também foram transduzidas. CONCLUSÕES: Os vetores lentivirais podem transferir genes heterolólogos para células corneanas epiteliais primárias expandidas ex vivo de forma eficiente. Os genes foram expressos de forma estável ao longo do tempo e puderam ser transferidos tanto para células epiteliais maduras como para presumíveis células tronco epiteliais. A eficiência de transdução foi obtida de forma dose-dependente.

Lentes de contato terapêuticas e as vantagens dos materiais de alto Dk: [revisão] / Therapeutic contact lenses and the advantages of high Dk materials: [review]

As lentes de contato terapêuticas são úteis para o tratamento de uma série de doenças da superfície ocular. Suas principais finalidades são: reduzir a dor; proteger a córnea; facilitar e manter a cicatrização epitelial; restaurar a câmara anterior e liberar medicamentos na superfície ocular. Há uma variedade de tipos e materiais, sendo que a escolha depende da doença a ser tratada, tempo de uso e necessidades fisiológicas do olho doente. Doenças como a ceratopatia bolhosa, erosão recorrente do epitélio corneano, olho seco e defeitos epiteliais pós-operatórios, além de várias outras doenças que afetam a superfície ocular podem ser tratadas com a utilização das lentes de contato terapêuticas. Elas não devem ser utilizadas em processos infecciosos ou em pacientes que estão impossibilitados de retornar para acompanhamento regular. A adaptação, controle e manutenção adequados das lentes de contato terapêuticas são fundamentais para prevenir complicações, como: neovascularização corneana, conjuntivite papilar gigante ou ceratite infecciosa. O controle e manutenção foram facilitados com o advento das lentes de contato terapêuticas de silicone-hidrogel. Essas lentes permitem trocas menos freqüentes devido a sua maior oxigenação e, em casos selecionados, aceleram a reepitelização corneana.

Therapeutic contact lenses are useful in a variety of ocular surface diseases. Their main indications are: to relieve the pain; protect ocular surface; promote corneal healing and epithelial regeneration; seal a leaking corneal wound and deliver ophthalmic drugs on the ocular surface. There are several kinds of lens designs and materials, and their choice is dependent on the specific disease to be treated, the duration of treatment and the physiologic needs of the diseased cornea. Bullous keratopathy, recurrent epithelial erosion syndrome, dry eye and postoperative epithelial defects are amongst their indications. Therapeutic contact lenses should not be indicated in the presence of active infectious keratitis or when the patient is not compliant. Corneal neovascularization, giant papillary conjunctivitis and infectious keratitis are serious complications, which can be prevented by correctly fitting and maintaining the therapeutic contact lenses. Silicon-hydrogel therapeutic contact lenses, due to their higher oxygen permeability, allow extended wear schedules, decreasing the need for frequent lens replacement.

Avaliação da cinética do epitélio corneano com marcadores de proliferação celular / Evaluation of the corneal epithelium kinetics using cell proliferation markers

OBJETIVO: Avaliar a cinética celular do epitélio corneano de coelhas em três situações: controle, hiperproliferação e hipoproliferação celular, com a utilização dos marcadores de proliferação celular BrdU, Ki-67/MIB-1 e AgNOR. MÉTODOS: Foram utilizadas quinze coelhas albinas que tiveram seus olhos aleatoriamente divididos em 3 grupos (A, B e C). O grupo A incluiu olhos que foram submetidos à instilação de tampão fosfato (total de 10 olhos); o grupo B, instilação de tampão fosfato após a remoção de uma área central do epitélio corneano de 10 mm (total de 10 olhos) e o grupo C, instilação de 5-fluoruracil em superfície ocular íntegra (total de 10 olhos). RESULTADOS: Os resultados da média e desvio-padrão do número de células marcadas pela BrdU nos grupos A, B e C foram, respectivamente, de 7,17 ± 0,74; 35,00 ± 3,01 e 0,22 ± 0,1 células marcadas por 100 células basais. As diferenças entre os grupos foram estatisticamente significantes. A média e o desvio padrão do número de células marcadas utilizando o Ki-67 foram de 7,55 ± 1,22 no grupo A; 35,55 ± 3,84 no grupo B e 0,34 ± 0,14 no grupo C. As diferenças entre os grupos foram estatisticamente significantes. A média e o desvio-padrão da medida da área das NORs no grupo A foram de 1,92 ± 0,24, no grupo B foram de 3,61 ± 0,27 e no grupo C foram de 1,71 ± 0,26. CONCLUSÕES: Os marcadores BrdU, Ki-67 e AgNOR apresentaram uma correlação positiva e estatisticamente significante nas situações de proliferação celular avaliadas (controle, hiperproliferação e hipoproliferação); o emprego do AgNOR não permitiu identificar diferenças na proliferação celular nas situações controle e hipoproliferação e houve maior concordância de resultados entre a BrdU e o Ki-67 nas três situações de proliferação celular.

PURPOSE: In order to maintain its clear and uniform structure, the corneal epithelium needs constant equilibrium between production (division) and desquamation of its epithelial cells. The author aimed to evaluate the cell kinetics of corneal epithelium of rabbits in three situations (control, hypoproliferation and hyperproliferation) using BrdU, Ki-67/MIB-1 and AgNORs proliferation markers. METHODS: Fifteen white female rabbits had their eyes randomly divided into three groups (A, B and. C). Group A included eyes submitted to phosphate buffer saline instillation (total 10 eyes); group B, instillation of phosphate buffer saline after removing a 10 mm central area of the corneal epithelium (total 10 eyes) and group C, instillation of 5-fluorouracil in normal epithelium (total 10 eyes). RESULTS: The results of the mean number and standard deviation of the marked cells using BrdU in groups A, B e C were, respectively, 7.17 ± 0.74; 35.00 ± 3.01 e 0.22 ± 0.1 marked cells per 100 basal cells. Differences among groups were statistically significant. The mean number and standard deviation of the labelled cells using Ki-67 were 7.55 ± 1.22 in group A; 35.55 ± 3.84 in group B and 0.34 ± 0.14 in group C. Differences among groups were statistically significant. The mean area and standard deviation of NORs in group A were 1.92 ± 0.24, in group B, 3.61 ± 0.27 and in group C, 1.71 ± 0.26. CONCLUSIONS: The markers BrdU, Ki-67 and AgNOR showed a positive correlation with statistical significance among the cellular proliferation situations studied (control, hypoproliferation and hyperproliferation); the AgNOR did not show statistically significant differences among the control and hypoproliferation situations and there was more agreement in the results among markers BrdU and Ki-67 in three cell proliferation situations.