Molecular characterization of Aeromonas hydrophila isolates from diseased fishes in district Kasur, Punjab, Pakistan / Caracterização molecular de isolados de Aeromonas hydrophila de peixes doentes no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão

Abstract Pakistan is an agricultural country and fisheries play a very important role in the economic development of the country. Different diseases are prevalent in Pakistani fish but information related to the causative agents is not well-known. Keeping in view the significance of bacterial pathogens as the causative agents of multiple fish diseases, the present study was conducted for identification, characterization and analysis of virulence genes of Aeromonas spp. isolated from diseased fishes. A total of fifty fish samples having multiple clinical indications were collected from different fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. For isolation of Aeromonas spp. samples were enriched and inoculated on Aeromonas isolation medium. Isolates were identified and characterized by different biochemical tests, Analytical Profile Index (API) 20E kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assays. All isolates were screened for three putative virulence genes including aerolysin (aer), haemolysin (hyl) and heat labile cytotonic enterotoxin (alt). Seven isolates of Aeromonas (A.) hydrophila were retrieved and identified based on API 20E. These isolates were further confirmed as A. hydrophila on the basis of PCR assays. Three isolates were detected positive for the presence of virulence genes (alt and hyl). Whereas aerolysin (aer) gene was not present in any of A. hydrophila isolates. The present study confirmed A. hydrophila as the causative agent of epizootic ulcerative syndrome and motile Aeromonas septicemia in fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. Moreover, detection of two virulence genes (alt and hyl) in A. hydrophila isolates is a threat for fish consumers of study area.

Resumo O Paquistão é um país agrícola, onde a pesca desempenha um papel muito importante para o desenvolvimento econômico. Diferentes doenças são prevalentes em peixes do Paquistão, mas as informações relacionadas aos agentes causadores não são bem conhecidas. Tendo em vista a importância dos patógenos bacterianos como agentes causadores de múltiplas doenças em peixes, o presente estudo foi conduzido para identificação, caracterização e análise de genes de virulência de isolados de Aeromonas spp. de peixes doentes. Foram coletadas 50 amostras de peixes com múltiplas indicações clínicas em diferentes fazendas do distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Para isolar Aeromonas spp., as amostras foram enriquecidas e inoculadas em meio de isolamento. Os isolados foram identificados e caracterizados por diferentes testes bioquímicos, kit Analytical Profile Index (API) 20E, e ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados foram selecionados para três genes de virulência putativos, incluindo aerolisina (aer), hemolisina (hyl) e enterotoxina citotônica termolábil (alt). Sete isolados de Aeromonas hydrophila foram recuperados e identificados com base no API 20E. Esses isolados foram posteriormente confirmados como A. hydrophila de acordo com ensaios de PCR. Três isolados indicaram a presença de genes de virulência (alt e hyl), enquanto o gene aerolisina (aer) não esteve presente em nenhum dos isolados de A. hydrophila. O presente estudo confirmou A. hydrophila como o agente causador da síndrome ulcerativa epizoótica e septicemia móvel por Aeromonas em fazendas de peixes, no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Além disso, a detecção de dois genes de virulência (alt e hyl) em isolados de A. hydrophila é uma ameaça para os consumidores de peixes da área de estudo.

Molecular characterization of Aeromonas hydrophila isolates from diseased fishes in district Kasur, Punjab, Pakistan

Abstract Pakistan is an agricultural country and fisheries play a very important role in the economic development of the country. Different diseases are prevalent in Pakistani fish but information related to the causative agents is not well-known. Keeping in view the significance of bacterial pathogens as the causative agents of multiple fish diseases, the present study was conducted for identification, characterization and analysis of virulence genes of Aeromonas spp. isolated from diseased fishes. A total of fifty fish samples having multiple clinical indications were collected from different fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. For isolation of Aeromonas spp. samples were enriched and inoculated on Aeromonas isolation medium. Isolates were identified and characterized by different biochemical tests, Analytical Profile Index (API) 20E kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assays. All isolates were screened for three putative virulence genes including aerolysin (aer), haemolysin (hyl) and heat labile cytotonic enterotoxin (alt). Seven isolates of Aeromonas (A.) hydrophila were retrieved and identified based on API 20E. These isolates were further confirmed as A. hydrophila on the basis of PCR assays. Three isolates were detected positive for the presence of virulence genes (alt and hyl). Whereas aerolysin (aer) gene was not present in any of A. hydrophila isolates. The present study confirmed A. hydrophila as the causative agent of epizootic ulcerative syndrome and motile Aeromonas septicemia in fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. Moreover, detection of two virulence genes (alt and hyl) in A. hydrophila isolates is a threat for fish consumers of study area.

Resumo O Paquistão é um país agrícola, onde a pesca desempenha um papel muito importante para o desenvolvimento econômico. Diferentes doenças são prevalentes em peixes do Paquistão, mas as informações relacionadas aos agentes causadores não são bem conhecidas. Tendo em vista a importância dos patógenos bacterianos como agentes causadores de múltiplas doenças em peixes, o presente estudo foi conduzido para identificação, caracterização e análise de genes de virulência de isolados de Aeromonas spp. de peixes doentes. Foram coletadas 50 amostras de peixes com múltiplas indicações clínicas em diferentes fazendas do distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Para isolar Aeromonas spp., as amostras foram enriquecidas e inoculadas em meio de isolamento. Os isolados foram identificados e caracterizados por diferentes testes bioquímicos, kit Analytical Profile Index (API) 20E, e ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados foram selecionados para três genes de virulência putativos, incluindo aerolisina (aer), hemolisina (hyl) e enterotoxina citotônica termolábil (alt). Sete isolados de Aeromonas hydrophila foram recuperados e identificados com base no API 20E. Esses isolados foram posteriormente confirmados como A. hydrophila de acordo com ensaios de PCR. Três isolados indicaram a presença de genes de virulência (alt e hyl), enquanto o gene aerolisina (aer) não esteve presente em nenhum dos isolados de A. hydrophila. O presente estudo confirmou A. hydrophila como o agente causador da síndrome ulcerativa epizoótica e septicemia móvel por Aeromonas em fazendas de peixes, no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Além disso, a detecção de dois genes de virulência (alt e hyl) em isolados de A. hydrophila é uma ameaça para os consumidores de peixes da área de estudo.

Detection of bluetongue virus in Brazilian cervids in São Paulo state / Detecção de vírus da língua azul em cervídeos brasileiros no estado de São Paulo

Viral hemorrhagic diseases in cervids occur worldwide and include epizootic hemorrhagic disease (EHD), bluetongue (BT), and adenoviral hemorrhagic disease (AHD). Since gross lesions in all three hemorrhagic diseases are identical (hemorrhagic enteropathy, pulmonary edema, systemic petechial and suffusion hemorrhages), it is necessary to use accurate techniques for a definitive etiologic diagnosis. Archival material (paraffin blocks) at the Department of Veterinary Pathology of FCAV - Unesp was reviewed for lesions of hemorrhagic disease and 42 captive and free-living Brazilian deer were selected to include in this study. Paraffin-embedded tissues were evaluated using immunohistochemistry and tested negative for adenovirus. Using real time RT-PCR, EHD virus was not detected in paraffin-embedded tissues in any of the cases evaluated. The same technique was used for detection of BT virus and seven positive animals (16,66%) were confirmed after agarose 4% gel electrophoresis and gene sequencing. The main macroscopic changes observed in the positive animals were hemorrhagic intestinal contents, reddish mucous membrane of the gastrointestinal tract, ulcers on tongue and petechiae in various organs. Microscopic changes observed were lymphocytic inflammatory infiltrate in liver, kidney and lungs, hemorrhage, and congestion in various organs. All positive cases were from captive animals, three females (two young and one adult), and four young males. This study demonstrates that the bluetongue virus is involved in hemorrhagic disease outbreaks of deer in Brazil.(AU)

Doenças hemorrágicas virais em cervídeos ocorrem no mundo todo e incluem a doença epizoótica hemorrágica (DEH), língua azul (LA), e doença hemorrágica por adenovírus (DHA). Uma vez que as lesões nas três doenças hemorrágicas são idênticas (enteropatia hemorrágica, edema pulmonar, petéquias sistêmicas e sufusões hemorrágicas), é necessário utilizar técnicas precisas para um diagnóstico etiológico definitivo. Material de arquivo (blocos de parafina) do Departamento de Patologia Veterinária da FCAV - Unesp foi revisado para lesões de doenças hemorrágicas e 42 cervídeos brasileiros de cativeiro e de vida livre foram selecionados e incluídos neste estudo. Tecidos embebidos em parafina foram avaliados usando imunohistoquímica e foram negativos para adenovírus. Usando o RT-PCR em tempo real, o vírus da DEH não foi detectado nos tecidos de nenhum dos casos avaliados. A mesma técnica foi utilizada para detecção do vírus da LA e sete animais positivos (16,66%) foram confirmados após eletroforese em gel de agarose a 4% e sequenciamento genético. As principais alterações macroscópicas observadas nos animais positivos foram conteúdo intestinal hemorrágico, mucosa do trato gastrointestinal avermelhada, úlceras na língua e petéquias em vários órgãos. As alterações microscópicas observadas foram infiltrado inflamatório linfocítico em fígado, rins e pulmões, e hemorragia e congestão em vários órgãos. Todos os casos positivos foram de animais de cativeiro, três fêmeas (dois jovens e um adulto), e quatro jovens do sexo masculino. Este estudo demonstra que o vírus da lingual azul está envolvido nos surtos de doença hemorrágica em veados no Brasil.(AU)

Occurrence of ferret enteric coronavirus in Brazil (Preliminary Report) / Ocorrência de coronavírus entérico de ferrets no Brasil - Nota Prévia

Ferret enteric coronavirus (FECV) is associated to the epizootic catarrhal enteritis (ECE) in ferrets (Mustela putorius furo). In this study, we report the occurrence of this agent in four diarrheic stool samples of domestic ferrets, analyzed by negative staining transmission electron microscopy and a specific RT-PCR assay targeting the nucleocapsid (N) gene. These findings are the first report of FECV in Brazil and address the importance of this virus on the etiology of enteric disorders in ferrets.

Coronavírus entérico de furões (FECV) é associado à enterite catarral epizoótica (ECE) em furões (Mustela putorius furo). Neste estudo, relatamos a ocorrência deste agente em quatro amostras fecais diarreicas de furões domésticos, analisadas por microscopia eletrônica de transmissão (contrastação negativa) e RT-PCR específica e direcionada ao gene de nucleocapsídeo (N). Estes achados constituem o primeiro relato de FECV no Brasil e remetem para a importância deste vírus na etiologia de quadros entéricos nestes animais.