RESUMO
Como a medula óssea é um dos órgãos mais acometidos pela leishmaniose visceral canina (LVC), amostras desta são frequentemente colhidas para exames parasitológicos, sendo possível a ocorrência de alterações mielodisplásicas, com consequente anemia, leucopenia e trombocitopenia. Assim, este estudo teve como objetivo investigar alterações histológicas e imunoistoquímicas na medula óssea do fêmur e manúbrio esternal de cães reativos para leishmaniose aos testes DPP® e ELISA. Para isso, 13 caninos da rotina epidemiológica para LVC realizada pela Diretoria de Vigilância de Zoonoses de Goiânia (DVZ), GO, Brasil, foram submetidos ao exame anatomopatológico. 46,2% e 53,9% das amostras de medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal apresentaram maior proporção da série vermelha, respectivamente. Além disso, havia variados graus de hiperplasia macrofágica, hemossiderose e emperipolese megacariocítica. Formas amastigotas de Leishmania spp. na medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal às avaliações histopatológicas e imunoistoquímicas foram observadas, com boa concordância entre essas, mas sem diferença na intensidade parasitária entre a medula óssea desses sítios anatômicos. Conclui-se que a medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal de cães reativos para leishmaniose aos testes DPP® e ELISA apresenta alterações histológicas decorrentes da doença, independente da presença ou intensidade do parasito, sendo hiperplasia de macrófagos, hemossiderose e emperipolese as principais alterações medulares nesses animais. Além disso, a medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal compreendem sítios anatômicos úteis ao diagnóstico de LVC por métodos diretos.
RESUMO
ABSTRACT: Visceral leishmaniasis is the most severe form of a human and animal disease complex entitled leishmaniasis, which is endemic to 70 countries. It is imperative to develop and offer technologies capable of increasing the resolution ability of control programs of this zoonosis. In the search for technological innovations in health, especially in environmental surveillance, the objective is to develop a mobile application (App) for smartphones in order to facilitate and systematize the notification of positive cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) by veterinarians working in clinics for assisting the municipal health surveillance in the management of this zoonosis. Thus, we developed an App, C7 LVC - Canine Visceral Leishmaniasis Notification System, with formatting based on the CR Campeiro 7® software. The technology created enables the filling of important gaps in information systems, facilitating the transmission of data and the use of this data by public management bodies to take CVL prevention and control actions.
RESUMO: A leishmaniose visceral é a forma mais grave de um complexo de doenças humanas e animais, denominado leishmaniose, endêmica em 70 países. É imprescindível desenvolver e oferecer tecnologias capazes de aumentar a capacidade de resolução dos programas de controle desta zoonose. Na busca por inovações tecnológicas em saúde, principalmente na vigilância ambiental, o objetivo é desenvolver um aplicativo móvel (App) para smartphones a fim de facilitar e sistematizar a notificação de casos positivos de leishmaniose visceral canina (LVC) por médicos veterinários que atuam em clínicas auxiliando a vigilância sanitária municipal, na gestão desta zoonose. Para tanto, foi desenvolvido um App, C7 LVC - Sistema de Notificação da Leishmaniose Visceral Canina, com formatação baseada no software CR Campeiro 7®. A tecnologia criada possibilita o preenchimento de lacunas importantes nos sistemas de informação, facilitando a transmissão de dados e a utilização desses dados pelos órgãos da gestão pública para a tomada de ações de prevenção e controle da LVC.
RESUMO
Visceral leishmaniasis is the most severe form of a human and animal disease complex entitled leishmaniasis, which is endemic to 70 countries. It is imperative to develop and offer technologies capable of increasing the resolution ability of control programs of this zoonosis. In the search for technological innovations in health, especially in environmental surveillance, the objective is to develop a mobile application (App) for smartphones in order to facilitate and systematize the notification of positive cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) by veterinarians working in clinics for assisting the municipal health surveillance in the management of this zoonosis. Thus, we developed an App, C7 LVC - Canine Visceral Leishmaniasis Notification System, with formatting based on the CR Campeiro 7® software. The technology created enables the filling of important gaps in information systems, facilitating the transmission of data and the use of this data by public management bodies to take CVL prevention and control actions.(AU)
A leishmaniose visceral é a forma mais grave de um complexo de doenças humanas e animais, denominado leishmaniose, endêmica em 70 países. É imprescindível desenvolver e oferecer tecnologias capazes de aumentar a capacidade de resolução dos programas de controle desta zoonose. Na busca por inovações tecnológicas em saúde, principalmente na vigilância ambiental, o objetivo é desenvolver um aplicativo móvel (App) para smartphones a fim de facilitar e sistematizar a notificação de casos positivos de leishmaniose visceral canina (LVC) por médicos veterinários que atuam em clínicas auxiliando a vigilância sanitária municipal, na gestão desta zoonose. Para tanto, foi desenvolvido um App, C7 LVC - Sistema de Notificação da Leishmaniose Visceral Canina, com formatação baseada no software CR Campeiro 7®. A tecnologia criada possibilita o preenchimento de lacunas importantes nos sistemas de informação, facilitando a transmissão de dados e a utilização desses dados pelos órgãos da gestão pública para a tomada de ações de prevenção e controle da LVC.(AU)
Assuntos
Animais , Software , Comunicação , Tecnologia da Informação , Smartphone , Leishmaniose VisceralRESUMO
Abstract Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonotic disease of high lethality caused by Leishmania infantum in the Americas. In the infected dog, the amastigotes are scarce in blood, especially in the late phase of the disease. This study aimed to report a rare case of L. infantum amastigotes found in neutrophils from peripheral blood of a naturally infected dog in terminal phase of CVL, also describing its clinical status before and after treatment with miltefosine 2%. The dog, which presented as polysymptomatic and with classical signs and symptoms of CVL was submitted to the following tests: Dual Path Platform (DPP) rapid test, ELISA and parasitological examination of peripheral blood. Hematological and biochemical parameters were obtained before and after treatment. All diagnostic tests were positive for CVL. The identification of L. infantum amastigotes inside neutrophils from peripheral blood was confirmed through microscopy, and the species was confirmed by molecular analysis. At the end of the treatment, peripheral parasitemia was not detected, and improvements were observed in clinical and laboratorial parameters. Finally, this atypical finding can be used as example to raise discussions about the real immunological role of neutrophils in late phases of CVL and its clinical/therapeutic implications.
Resumo A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica de alta letalidade causada por Leishmania infantum nas Américas. No cão infectado, as formas amastigotas são escassas no sangue, principalmente na fase tardia da doença. Este estudo teve como objetivo relatar um caso raro de amastigotas de L. infantum encontradas em neutrófilos do sangue periférico de um cão naturalmente infectado e terminal da LVC, descrevendo também seu estado clínico antes e após o tratamento com miltefosina a 2%. O cão, que se apresentou como polissintomático e com sinais e sintomas clássicos da LVC foi submetido aos seguintes testes: teste rápido Dual Path Platform (DPP), ELISA e exame parasitológico de sangue periférico. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos foram obtidos antes e após o tratamento. Todos os testes diagnósticos foram positivos para LVC. A identificação de formas amastigotas de L. infantum, dentro de neutrófilos do sangue periférico foi confirmada por microscopia, e a espécie foi confirmada por análise molecular. Ao final do tratamento, não foi detectada parasitemia periférica, observando-se melhora dos parâmetros clínicos e laboratoriais. Por fim, esse achado atípico pode ser usado como exemplo para levantar discussões sobre o real papel imunológico dos neutrófilos nas fases tardias da LVC e suas implicações clínicas/terapêuticas.
Assuntos
Animais , Cães , Leishmania infantum , Doenças do Cão/diagnóstico , Leishmaniose Visceral/diagnóstico , Leishmaniose Visceral/veterinária , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , NeutrófilosRESUMO
The objective of this study was to estimate the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) and to identify the differences in associated factors to its occurrence in urban area and countrysides in the municipality of Santa Luzia located in the semi-arid region of Paraíba. In the years 2015 and 2016, 779 blood samples from dogs were collected. The prevalence was determined by three serological techniques, ELISA-S7® Kit, DPP® Rapid Test and EIE-LVC® Kit, considering positive the samples that reacted in at least two assays. Associated factors were determined by univariate and multivariate analyzes of the guardians' responses to the epidemiological questionnaire. The prevalence of anti-Leishmania infantum antibodies in the studied municipality was 15.00% (117/779), being higher in the urban area (15.20%) than in the countryside (13.60%). The neighborhood with the highest prevalence was Frei Damião with 26.40% (33/125), being considered a hotspot (OR 1.245, p=0.007). Other associated factors were the semi-domiciliary breeding (OR 1.798, p=0.025), in the urban area, and hunting dog (OR 18.505, p=0.016), contact with cattle (OR 17.298, p=0.022) and environment where the dog is raised (OR 4.802, p=0.024) in the countryside. In the municipality of Santa Luzia, the prevalence of canine visceral leishmaniasis is high and the disease is widely distributed. Epidemiological differences between urban area and the countryside could be observed demonstrating the need for more adequate control measures for each locality and proving the urbanization process.(AU)
O objetivo desta pesquisa foi estimar a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) e identificar as diferenças nos fatores relacionados à sua ocorrência nas zonas urbana e rural do município de Santa Luzia, localizado no semiárido paraibano. Nos anos de 2015 e 2016, coletaram-se 779 amostras de sangue de cães. A prevalência foi determinada através de três técnicas sorológicas, Kit ELISA-S7®, teste rápido DPP® e Kit EIE-LVC®, considerando positivas as amostras que reagiram em, pelo menos, dois ensaios. Os fatores relacionados foram determinados por meio das análises estatísticas uni e multivariada das respostas dos tutores ao questionário epidemiológico. A prevalência de anticorpos anti-Leishmania infantum encontrada no município estudado foi de 15,00% (117/779), sendo maior na zona urbana (15,20%) do que na rural (13,60%). O bairro que apresentou maior prevalência foi o Frei Damião com 26,40% (33/125), sendo considerado um hotspot (OR 1,245; p=0,007). Outros fatores relacionados encontrados foram a criação semidomiciliar (OR 1,798; p=0,025), na zorna urbana, e cão de caça (OR 18,505; p=0,016), contato com bovinos (OR 17,298; p=0,022) e ambiente onde o cão é criado (OR 4,802; p=0,024), na zona rural. Verifica-se a elevada prevalência da leishmaniose visceral canina e a sua ampla distribuição no município de Santa Luzia. Diferenças epidemiológicas entre as zonas urbana e rural puderam ser observadas, demonstrando a necessidade de medidas de controle mais adequadas para cada localidade e comprovando o processo de urbanização.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Inquéritos Epidemiológicos , Leishmania infantum , Leishmaniose Visceral/epidemiologia , Ensaio de Imunoadsorção EnzimáticaRESUMO
ABSTRACT: The objective of this study was to estimate the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) and to identify the differences in associated factors to its occurrence in urban area and countrysides in the municipality of Santa Luzia located in the semi-arid region of Paraíba. In the years 2015 and 2016, 779 blood samples from dogs were collected. The prevalence was determined by three serological techniques, ELISA-S7® Kit, DPP® Rapid Test and EIE-LVC® Kit, considering positive the samples that reacted in at least two assays. Associated factors were determined by univariate and multivariate analyzes of the guardians responses to the epidemiological questionnaire. The prevalence of anti-Leishmania infantum antibodies in the studied municipality was 15.00% (117/779), being higher in the urban area (15.20%) than in the countryside (13.60%). The neighborhood with the highest prevalence was Frei Damião with 26.40% (33/125), being considered a hotspot (OR 1.245, p=0.007). Other associated factors were the semi-domiciliary breeding (OR 1.798, p=0.025), in the urban area, and hunting dog (OR 18.505, p=0.016), contact with cattle (OR 17.298, p=0.022) and environment where the dog is raised (OR 4.802, p=0.024) in the countryside. In the municipality of Santa Luzia, the prevalence of canine visceral leishmaniasis is high and the disease is widely distributed. Epidemiological differences between urban area and the countryside could be observed demonstrating the need for more adequate control measures for each locality and proving the urbanization process.
RESUMO: O objetivo desta pesquisa foi estimar a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) e identificar as diferenças nos fatores relacionados à sua ocorrência nas zonas urbana e rural do município de Santa Luzia, localizado no semiárido paraibano. Nos anos de 2015 e 2016, coletaram-se 779 amostras de sangue de cães. A prevalência foi determinada através de três técnicas sorológicas, Kit ELISA-S7®, teste rápido DPP® e Kit EIE-LVC®, considerando positivas as amostras que reagiram em, pelo menos, dois ensaios. Os fatores relacionados foram determinados por meio das análises estatísticas uni e multivariada das respostas dos tutores ao questionário epidemiológico. A prevalência de anticorpos anti-Leishmania infantum encontrada no município estudado foi de 15,00% (117/779), sendo maior na zona urbana (15,20%) do que na rural (13,60%). O bairro que apresentou maior prevalência foi o Frei Damião com 26,40% (33/125), sendo considerado um hotspot (OR 1,245; p=0,007). Outros fatores relacionados encontrados foram a criação semidomiciliar (OR 1,798; p=0,025), na zorna urbana, e cão de caça (OR 18,505; p=0,016), contato com bovinos (OR 17,298; p=0,022) e ambiente onde o cão é criado (OR 4,802; p=0,024), na zona rural. Verifica-se a elevada prevalência da leishmaniose visceral canina e a sua ampla distribuição no município de Santa Luzia. Diferenças epidemiológicas entre as zonas urbana e rural puderam ser observadas, demonstrando a necessidade de medidas de controle mais adequadas para cada localidade e comprovando o processo de urbanização.
RESUMO
A Leishmaniose visceral humana (LV) está em franca expansão e distribuída nas cinco regiões geográficas do Brasil, o Nordeste sendo a região em que há o maior número de casos registrados. O principal reservatório urbano do agente etiológico da LV é o cão doméstico e sabe-se que casos caninos antecedem o aparecimento de casos humanos. Uma das ações de controle da LV, preconizada pelo Ministério da Saúde, é a eutanásia dos cães soro reagentes. Em 2013, no município de Iguatama/MG, foi realizado o primeiro inquérito sorológico canino na cidade, sendo constatada uma prevalência de 8,3% de cães soro reagentes para Leishmania infantum. Dos animais com sorologia positiva para Leishmaniose visceral canina (LVC), neste inquérito, 84% foram eutanasiados e 16% foram a óbito em, no máximo, dois anos após o diagnóstico. Nenhuma outra medida de controle para LVC foi realizada no município. Os objetivos deste estudo foram determinar a prevalência atual de cães soro reagentes para LVC no município de Iguatama e observar o impacto das eutanásias de cães soro reagentes para LV como única medida de controle realizada neste município, considerado área enzoótica para a doença. Para isso, foi realizado um novo inquérito epidemiológico canino no município de Iguatama, seguindo as normas do Manual de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral. Foram colhidas amostras sanguíneas de 270 cães que foram examinadas pelo teste imunocromatográfico DPP® e pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os animais que apresentaram resultados inconclusivos tiveram novas amostras de sangue coletadas e analisadas. O único animal que apresentou resultado positivo no DPP® e indeterminado no ELISA, na primeira avaliação, soro converteu quatro meses depois, o que reforça a recomendação do Ministério da Saúde de reavaliar os cães que apresentam resultado inconclusivo para LVC. Do total das 270 amostras, 21 foram reagentes nos dois testes. Portanto, a prevalência de cães soro reagentes para LVC, em 2017, na área urbana do município de Iguatama foi igual a 7,8%. A infecção pela espécie Leishmania infantum foi confirmada através da técnica molecular de PCR-RFLP em 10 cães amostrados com sorologia positiva para LVC. A comparação entre a prevalência atual (depois das eutanásias) com a encontrada em 2013 (8,3%), não mostrou diferença significativa (p=0,764). Uma vez que a soro prevalência de LVC na área urbana do município de Iguatama ainda é alta, pode-se supor que a eutanásia dos cães soro reagentes para LVC, somada à ausência de monitoramento e de outras medidas de intervenção, não contribuiu para a diminuição da transmissão do parasito, e não foi suficiente para o controle de LVC no município de Iguatama, uma área considerada, até 2013, indene para LVC.
RESUMO
Human Visceral Leishmaniasis (VL) is expanding, and it is distributed in the five geographic regions of Brazil, with the Northeast being the region that presents the most significant number of registered cases. The main urban reservoir of the etiological agent of VL is the domestic dog, and it is known that canine cases precede human cases. One of the control actions of VL, recommended by the Ministry of Health, is performing the euthanasia of seropositive dogs. In 2013, in the municipality of Iguatama/MG, the first canine serological survey was carried out in the city, with a prevalence of 8.3% of seropositive dogs for Leishmania infantum. Of the seropositive animals for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) in this survey, 84% were euthanized, and 16% died within two years after diagnosis. No other control measures for CVL were taken in the municipality. The objectives of the present study were to determine the current prevalence of seropositive dogs for CVL in the municipality of Iguatama and to observe the impact of euthanasia of seropositive dogs to VL as the only control measure performed in this municipality, which is considered an enzootic area of the disease. For this, a new canine epidemiological survey was carried out in the municipality of Iguatama, following the guidelines of the Manual of Surveillance and Control of Visceral Leishmaniasis. Blood samples were collected from 270 dogs and tested by DPP® immunochromatographic test and by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The animals that presented inconclusive results had new blood samples collected and analyzed. The only animal that showed a positive result in DPP® and undetermined in the ELISA, in the first evaluation, became seropositive four months later, so this study reinforces the recommendation of the Ministry of Health to reassess dogs that present inconclusive results for CVL. From a total of 270 samples, 21 (7.8%) were reagents in both tests. Thus, the prevalence of seropositive dogs for CVL, in 2017, in the urban area of the municipality of Iguatama was 7.8%. The Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) molecular technique confirmed infection by L. infantum in the ten dogs sampled with CVL-positive serology. The comparison between the current prevalence (after euthanasia) with that found in 2013 (8.3%), there was no significant difference (p=0.764). The prevalence of CVL in the urban area of the municipality of Iguatama is still high, making it possible to presume that the euthanasia of seropositive dogs for CVL, and the absence of monitoring or other interventions measures, did not contribute to decrease the transmission of the parasite and was not sufficient for the control of CVL in the municipality of Iguatama, an area considered as non-endemic to CVL until 2013.(AU)
A Leishmaniose visceral humana (LV) está em franca expansão e distribuída nas cinco regiões geográficas do Brasil, o Nordeste sendo a região em que há o maior número de casos registrados. O principal reservatório urbano do agente etiológico da LV é o cão doméstico e sabe-se que casos caninos antecedem o aparecimento de casos humanos. Uma das ações de controle da LV, preconizada pelo Ministério da Saúde, é a eutanásia dos cães soro reagentes. Em 2013, no município de Iguatama/MG, foi realizado o primeiro inquérito sorológico canino na cidade, sendo constatada uma prevalência de 8,3% de cães soro reagentes para Leishmania infantum. Dos animais com sorologia positiva para Leishmaniose visceral canina (LVC), neste inquérito, 84% foram eutanasiados e 16% foram a óbito em, no máximo, dois anos após o diagnóstico. Nenhuma outra medida de controle para LVC foi realizada no município. Os objetivos deste estudo foram determinar a prevalência atual de cães soro reagentes para LVC no município de Iguatama e observar o impacto das eutanásias de cães soro reagentes para LV como única medida de controle realizada neste município, considerado área enzoótica para a doença. Para isso, foi realizado um novo inquérito epidemiológico canino no município de Iguatama, seguindo as normas do Manual de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral. Foram colhidas amostras sanguíneas de 270 cães que foram examinadas pelo teste imunocromatográfico DPP® e pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os animais que apresentaram resultados inconclusivos tiveram novas amostras de sangue coletadas e analisadas. O único animal que apresentou resultado positivo no DPP® e indeterminado no ELISA, na primeira avaliação, soro converteu quatro meses depois, o que reforça a recomendação do Ministério da Saúde de reavaliar os cães que apresentam resultado inconclusivo para LVC. Do total das 270 amostras, 21 foram reagentes nos dois testes. Portanto, a prevalência de cães soro reagentes para LVC, em 2017, na área urbana do município de Iguatama foi igual a 7,8%. A infecção pela espécie Leishmania infantum foi confirmada através da técnica molecular de PCR-RFLP em 10 cães amostrados com sorologia positiva para LVC. A comparação entre a prevalência atual (depois das eutanásias) com a encontrada em 2013 (8,3%), não mostrou diferença significativa (p=0,764). Uma vez que a soro prevalência de LVC na área urbana do município de Iguatama ainda é alta, pode-se supor que a eutanásia dos cães soro reagentes para LVC, somada à ausência de monitoramento e de outras medidas de intervenção, não contribuiu para a diminuição da transmissão do parasito, e não foi suficiente para o controle de LVC no município de Iguatama, uma área considerada, até 2013, indene para LVC.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Cães/parasitologia , Leishmaniose Visceral/prevenção & controle , Leishmaniose Visceral/veterinária , Leishmaniose Visceral/epidemiologia , Controle de Doenças Transmissíveis , Eutanásia AnimalRESUMO
Abstract The aim of this study was to compare molecular tests used to diagnose Leishmania spp. in dogs with different stages of infection. Blood and conjunctival swab (CS) samples from dogs classified in four clinical stages were subjected to different PCR protocols (13A/13B, MC1/MC2, LITSR/L5.8S and LEISH-1/LEISH-2 primers). To the study, 22.3% (48/215) of dogs were classified as without clinical signs, 67.5% (145/215) stage I (mild disease), 7.0% (15/215) stage II (moderate disease) and 3.2% (7/215) stage III (severe disease). The results showed that in blood samples, 13A/13B detected a significant higher number of positive dogs in stage I (25/145) and in total (42/215) (p≤0.05). However, when CS samples were tested, no difference was observed (p>0.05). On the other hand, in blood samples, MC1/MC2 detected significantly fewer positive dogs classified as without clinical signs (0/48), in stage I (0/145) and in total (1/215) (p≤0.05). Likewise, in CS samples, this primers showed also lower detection (1/215) (p≤0.05). So than, we can conclude that PCR on blood samples with 13A/13B primers has greater capacity to detect positive dogs, mainly at the initial of clinical disease than do other primers and MC1/MC2 are not a good choice to detect Leishmania infantum infection in dogs.
Resumo O objetivo deste estudo foi comparar testes moleculares usados para diagnosticar Leishmania spp., em cães apresentando diferentes estágios de infecção. Amostras de sangue e suabe conjuntival (SC) de cães classificados em quatro estágios clínicos foram submetidas a diferentes PCRs (primers 13A/13B, MC1/MC2, LITSR/L5.8S e LEISH-1/LEISH-2). Para o estudo, 22,3% (48/215) dos cães foram classificados como sem sinais clínicos, 67,5% (145/215) estágio I (doença leve), 7,0% (15/215) estágio II (doença moderada) e 3,2% (7/215) estágio III (doença grave). Os resultados mostraram que, em amostras de sangue, 13A/13B detectou número significativamente maior de cães positivos no estágio I (25/145) e no total (42/215) (p≤0,05). No entanto, quando as amostras de SC foram testadas, nenhuma diferença foi observada (p>0,05). Por outro lado, no sangue, MC1/MC2 detectou significativamente menos cães positivos sem sinais clínicos (0/48), em estágio I (0/145) e no total (1/215) (p≤0,05). Da mesma forma, em amostras de SC, MC1/MC2 também apresentou menor detecção (1/215) (p≤0,05). Assim, a PCR em amostras de sangue com 13A/13B tem maior capacidade de detectar cães positivos, principalmente no início da doença do que outros primers, e o par de primers MC1/MC2 não é uma boa escolha para detectar infecção por Leishmania infantum em cães.
Assuntos
Animais , Cães , Leishmaniose Cutânea/veterinária , Doenças do Cão/diagnóstico , Leishmaniose Visceral/veterinária , Índice de Gravidade de Doença , Brasil/epidemiologia , DNA de Protozoário/genética , Leishmaniose Cutânea/diagnóstico , Leishmaniose Cutânea/epidemiologia , Leishmania infantum/genética , Doenças do Cão/epidemiologia , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/veterinária , Leishmaniose Visceral/diagnóstico , Leishmaniose Visceral/epidemiologiaRESUMO
Devido à ampla distribuição da leishmaniose visceral (LV) no Brasil e à importância dos cães no ciclo de transmissão dessa zoonose, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de Leishmania spp. e caracterizar a espécie circulante em diferentes tecidos biológicos de cães da Baixada Cuiabana, Mato Grosso, Brasil. Amostras de sangue, linfonodo e medula óssea foram coletadas de 205 cães para realização de análise parasitológica por citologia e análise molecular por meio da nested PCR (nPCR) e do sequenciamento . Dos 205 cães estudados, 34 (16,58%) animais foram positivos pela nPCR, dos quais 12 possuíam formas amastigotas de Leishmania spp. na citologia. Amostras positivas na nPCR foram sequenciadas e caracterizadas como Leishmania (Leishmania) infantum. A sensibilidade da nPCR nas amostras de medula óssea, linfonodo e sangue foi de 94,87%, 91,8% e 98%, respectivamente, enquanto a especificidade foi de 100% para todas as amostras. O presente estudo relata a ocorrência de LV canina em 16,58% dos cães analisados, caracterizando a L. infantum como agente causador. Entre as amostras avaliadas, a medula óssea foi a única a apresentar concordância substancial entre as técnicas de nPCR e citologia (k = 0,643), sendo considerada a amostra mais adequada para o diagnóstico da doença. Os resultados ampliam o conhecimento de espécies de Leishmania infectando cães no Brasil, destacando a importância da identificação etiológica em áreas com escassos dados moleculares.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Leishmania infantum/isolamento & purificação , Leishmania/isolamento & purificação , Leishmaniose Visceral/diagnóstico , Leishmaniose Visceral/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterináriaRESUMO
Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoa Leishmania infantum and can cause an inflammatory reaction in the gastrointestinal tract, however the role of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) in the intestine of dogs infected is not fully understood. We performed a quantitative analysis these cells in the intestinal wall of dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL). Twenty dogs were assigned to one of three groups: group 1 (G1, n=8), dogs with CVL and L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=9), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). Granulocytic cells were counted in the crypt-villus unit (mucosa), submucosa, and muscle layer of the intestinal mucosa. Cell counts were higher in the intestinal wall of dogs from G2 followed by G1 and G3 (p≤0.05). In G1, there was a low inverse correlation between parasite burden of the small intestine and granulocyte counts (r= -0.1, p≤0.01). However, in G2 dogs, mast cell and eosinophil numbers showed positive correlation (r=0.85, p≤0.01). The granulocytic cell hyperplasia observed in the intestine of L. infantum-infected dogs suggests that these cells may be involved in the cell-mediated immune response for parasite elimination.
Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e pode causar uma reação inflamatória no trato gastrointestinal, entretanto o papel das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) no intestino de cães infectados não é totalmente compreendido. Neste estudo realizamos uma análise quantitativa dessas células na parede intestinal de cães com LV. Vinte cães foram distribuídos em três grupos: grupo 1 (G1, n=8), cães com LV e amastigotas de L. infantum no intestino; grupo 2 (G2, n=9), cães com LV, mas sem amastigotas intestinais; e grupo 3 (G3, n=3), não infectados (grupo controle). Células granulocíticas foram contadas na unidade cripta-vilo (mucosa), submucosa e camada muscular da mucosa intestinal. Observamos hiperplasia dessas células na parede intestinal de cães do G2, seguidas das G1 em relação ao G3 (p≤0,05). No G1, houve uma correlação inversa baixa entre a carga parasitária do intestino delgado e a contagem de granulócitos (r= -0,1; p≤0,01). No entanto, nos cães do G2, os números de mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva (r=0,85; p≤0,01). A hiperplasia de células granulocíticas observada no intestino de cães infectados por L. infantum sugere que essas células podem estar envolvidas na resposta imune mediada por células para a eliminação do parasita.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Cães , Leishmania infantum , Doenças do Cão/patologia , Mucosa Intestinal/patologia , Leishmaniose Visceral/patologia , Estudos de Casos e Controles , Doenças do Cão/parasitologia , Eosinófilos/patologia , Mucosa Intestinal/parasitologia , Leishmaniose Visceral/parasitologia , Mastócitos/patologia , Neutrófilos/patologiaRESUMO
This study was performed to evaluate the effects of autoclaving and storage in 85% glycerol on cortical bone from dogs infected with Leishmania sp. We used 42 cadavers with leishmaniasis. The dogs were evaluated for the presence of Leishmania sp. in culture of bone marrow and by culturing cortical bone. From the infected animals, we harvested 42 diaphysis of the right femur for culture of cortical bone before and after autoclaving or storage in glycerol. There was no significant difference in growth of the parasite in culture of bone marrow or cortical bone. There was no growth of Leishmania sp. in culture of samples after autoclaving or storage in glycerol. Both treatments were effective in preventing the growth of the parasite in vitro, so it was considered viable for grafting.(AU)
Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da esterilização em autoclave e do armazenamento em glicerol a 85% no osso cortical de cães infectados por Leishmania sp. Foram utilizados 42 cadáveres de cães com leishmaniose. Os cães foram avaliados para a presença de Leishmania sp. em cultura de medula óssea e de osso cortical. Foram coletadas 42 diáfises do fêmur direito para cultura do osso cortical antes e após a esterilização e o armazenamento em glicerol. Não houve diferença significativa no crescimento do parasito em cultura utilizando-se medula óssea ou osso cortical. Não houve crescimento de Leishmania sp. em cultura de amostras de osso cortical após a autoclavagem ou o armazenamento em glicerol. Ambos os tratamentos foram eficazes na prevenção do crescimento do parasita in vitro, de modo que foram considerados viáveis para enxerto.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Leishmania infantum/patogenicidade , Esterilização/estatística & dados numéricos , Transplante Ósseo/veterinária , GlicerolRESUMO
The territory located in the border of Argentina, Brazil and Paraguay is endemic for tegumentary leishmaniasis (TL). However, Lutzomyia longipalpis first report in the area was in 2010-Argentina, in 2012-Brazil, and no records in the Paraguayan border despite of reports of human visceral leishmaniasis (VL) cases. Therefore, we developed a research from 2014 to 2017 to study VL in the three-country border at locality level; Uruguay-2015, and Bolivia-2016 joined latter due to the alerts of VL in the Argentinean borders. The space-time distributions of vectors, infected dogs and environmental variables were recorded and associated at three progressive scales, while anthropological surveys were performed. Three scenarios were characterized based on canine VL prevalence, vector presence-abundance and the spatial distribution consistency between them: settled VL, incipient VL, and steady TL with imported canine VL. The vector abundance was clustered in hot spots persistent in time that could act as source populations. The clustering distribution was associated with environmental variables at the different scales studied. Therefore, the vector distribution (proxy of human-dog exposure) could be modeled in recent southern scenarios to focus the surveillance and interventions on predicted hot spots, in order to increase the effectiveness and efficiency of program activities.
O território localizado na fronteira da Argentina, Brasil e Paraguai é endêmico para leishmaniose tegumentar (LT). Entretanto, o primeiro relato de Lutzomyia longipalpis na área foi em 2010-Argentina, em 2012-Brasil, sem registros na fronteira em Paraguai apesar dos casos de leishmaniose visceral humana (LV). Portanto, desenvolvemos uma pesquisa de 2014 a 2017 para estudar a LV na tríplice fronteira em nível de localidades; Uruguai-2015 e Bolívia-2016 aderiram mais tarde devido aos alertas de LV nas fronteiras argentinas. As distribuições espaço-temporais de vetores, cães infectados e as variáveis ambientais foram registradas e associadas em três escalas progressivas, enquanto se realizou o inquérito antropológico. Três cenários foram caracterizados com base na prevalência de LV canina, na abundância-presença de vetores, e a coerência da distribuição espacial entre eles: LV instalada, LV incipiente e LT estável com LV canina importada. A abundância de vetores foi agrupada em pontos quentes persistentes no tempo que poderiam atuar como populações fonte. A distribuição de agrupamento foi associada a variáveis ambientais nas diferentes escalas. Portanto, a distribuição vetorial (proxy da exposição humana a cães) poderia ser modelada em cenários recentes do sul para focar a vigilância e as intervenções nos pontos quentes previstos, a fim de aumentar a eficácia e a eficiência das atividades do programa.
Assuntos
Estudos Epidemiológicos , Inquéritos Epidemiológicos , Leishmaniose Cutânea/epidemiologia , Leishmaniose Cutânea/transmissão , Argentina/epidemiologia , Brasil/epidemiologia , Modelos Estatísticos , Paraguai/epidemiologiaRESUMO
O objetivo deste trabalho foi avaliar a acurácia da PCR quantitativa (qPCR) realizada em amostras de pele íntegra congelada (FT) e parafinada (FFPE). Trata-se de um estudo de validação, com amostras provenientes de 46 cães de uma área endêmica no Brasil. Após as coletas de amostras, as extrações de DNA foram realizadas utilizando-se kits comerciais, e a qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum. Os resultados obtidos para as amostras FFPE foram 63,6% de sensibilidade e 77,1% de especificidade; para as amostras FT, 100% e 48,6%, respectivamente. A concordância dos resultados da técnica de qPCR com amostras FT e FFPE foi pobre. Os resultados sugerem que o congelamento é o método mais adequado de conservação para banco de amostras para recuperação de DNA.
RESUMO
The purpose of the present work was to evaluate the accuracy of quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on samples of fresh frozen tissue (FT) and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) healthy skin. This is a validation study conducted with samples from 46 dogs from an endemic area in Brazil. After sample collection, DNA extractions were conducted using commercial kits and qPCR was oriented to kinetoplast DNA (kDNA) targets of the Leishmania infantum species. The results obtained for the FFPE samples showed 63.6% sensitivity and 77.1% specificity, whereas those obtained for the FT samples showed 100% and 48.6%, respectively. Poor agreement was observed for the results of the qPCR technique with FT and FFPE samples. Our results suggest freezing as the most suitable conservation method for the formation of sample databases considering DNA recovery.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar a acurácia da PCR quantitativa (qPCR) realizada em amostras de pele íntegra congelada (FT) e parafinada (FFPE). Trata-se de um estudo de validação, com amostras provenientes de 46 cães de uma área endêmica no Brasil. Após as coletas de amostras, as extrações de DNA foram realizadas utilizando-se kits comerciais, e a qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum. Os resultados obtidos para as amostras FFPE foram 63,6% de sensibilidade e 77,1% de especificidade; para as amostras FT, 100% e 48,6%, respectivamente. A concordância dos resultados da técnica de qPCR com amostras FT e FFPE foi pobre. Os resultados sugerem que o congelamento é o método mais adequado de conservação para banco de amostras para recuperação de DNA.(AU)
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Animais , Cães , Confiabilidade dos Dados , Leishmania infantum/isolamento & purificação , Leishmaniose Visceral/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Pele/microbiologia , ParafinaRESUMO
INTRODUÇÃO: A urbanização é um processo que afeta diversos fatores relevantes para a Leishmaniose Visceral (LV). Devido a essa influência, características próprias da doença foram gradualmente adaptadas diante de uma nova realidade, acompanhando a progressão do processo de urbanização, tornando o cão o principal reservatório da doença em áreas urbanas. O aumento no número de casos da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) resulta em um aumento de casos em humanos, tornando-se tópico de grande importância para a Saúde Pública. A associação do processo de urbanização com o aumento de diversos tipos de doenças como a LV e LVC, está intimamente relacionada à implementação de uma urbanização desordenada e sem planejamento. OBJETIVO: Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar possíveis associações entre as alterações ambientais e socioeconômicas relacionadas ao nível de urbanização em Camaçari BA com o número e distribuição de casos de Leishmaniose Visceral Canina no período de 2011 a 2015. MATERIAIS E MÉTODOS: Trata-se de um estudo de corte transversal baseado em dados do censo demográfico (IBGE - 2010) e dados coletados de estudos realizados nos períodos de 2011 a 2012 e de 2014 a 2015. Foram realizadas análises espaciais, produzindo mapas de kernel, implementando Buffer nos locais de captura do L. longipalpis e classificação das áreas quanto a urbanização, além da análise dos dados dos questionários e do censo avaliando os dois períodos. RESULTADOS: Os resultados demonstraram um aumento da frequência relativa de casos positivos entre os períodos (p < 0,05), todavia com distribuições diferentes. Foi possível identificar áreas de aglomeração de casos em ambos os estudos, porém sem determinação de área de risco para a doença. Houve um aumento na porcentagem de residências que recebem incentivo do governo (p < 0,05). Nos dois períodos, foi possível observar casos positivos dentro dos buffers, com 75% de cães positivos no período 1 e 72,5% no 2, não havendo associação entre locais com captura de flebotomíneo e positividade para LVC. Não houve associação de captura de flebotomíneos com características domésticas e sociodemográficas. Foi possível identificar que houve associação entre a ocorrência de LVC nas residências e elementos como a presença de lixo associada a aumento de 1,35 vezes na prevalência, presença de esgoto a céu aberto com 0,54 e presença de área urbana com 1,31. A classificação da urbanização demonstrou um aumento entre os períodos em todos os distritos (p<0,05), explicitando que houve aumento de urbanização no município. Houve correlação positiva entre as variáveis pessoa residente de cor preta, abastecimento de água de rede geral e coleta de lixo com presença de residências positivas para LVC. CONCLUSÕES: Foram identificadas características relacionadas ao aumento da prevalência de LVC como localização em área urbana e presença de lixo acumulado e correlações com fatores associados a urbanização como abastecimento de água em rede geral e coleta de lixo e fatores sociais como pessoa residente de cor preta, possibilitando um melhor foco e investimento, de forma apropriada, na prevenção e controle da Leishmaniose Visceral Humana e Canina em áreas que se apresentam em processo constante de urbanização
Assuntos
Urbanização , Análise Espacial , Distribuição de ProdutosRESUMO
ABSTRACT: The objective of the current research was to assess seroconversion in dogs immunized with Leishmune® and Leish Tec® vaccines using rapid chromatographic immunoassay DPP® (Dual Path Platform) (DPP CVL) and enzyme immunoassay (EIE) up to one year after the vaccination protocol. The study sample comprised 28 dogs divided into two groups, each group immunized with an anti-CVL vaccine and clinically monitored for one year through clinical evaluation and laboratory tests. 22 (78.5%) dog were monitored. During the evaluation time (T1-30 days, T2-6 months, and T3-1 year after vaccination) the results for all dogs were negative for CVL, except for one animal vaccinated with Leish tec® that seroconverted in the DPP CVL test at T2. Subsequent examinations of this dog were negative. Our results showed that in a non-endemic area, even at different evaluation times, dogs vaccinated against CVL with Leishmune® or Leish tec® did not seroconvert in the serological protocol used by the Brazilian Ministry of Health (DPP/EIE).
RESUMO: O objetivo deste trabalho foi avaliar a soroconversão em cães imunizados com as vacinas Leishmune® e Leish tec®, através do teste imunocromatográfico rápido DPP® (Dual Path Platform) (DPP LVC) e do ensaio imunoenzimático (EIE) durante um ano após o protocolo vacinal. Trata-se de um estudo onde 28 cães divididos em dois grupos foram imunizados cada um com uma vacina anti - LVC e acompanhados durante um ano através de avaliação clínica e exames laboratoriais. Foi possível acompanhar 22 (78.5%) cães. Nos exames dos tempos 1, 2 e 3 (respectivamente 30 dias, 6 messes e 1 ano após a vacinação) os resultados de todos os cães também foram negativos para LVC, exceto de um cão que recebeu a vacina Leish tec® e soroconverteu no DPP LVC no T2, após 6 meses a vacina. Os exames posteriores deste cão foram negativos. Os resultados do presente estudo demostraram que, em área não endêmica e mesmo em diferentes tempos de avaliação, cães vacinados contra LVC, independente da vacina utilizada, não foram capazes de soroconverter no protocolo utilizado pelo Ministério da Saúde brasileiro (DPP/EIE).
RESUMO
Visceral Leishmaniasis by Leishmania infantum chagasi is an endemic zoonosis present in many areas of Brazil. This parasite needs reservoirs for maintenance of the infection and the presence of dogs in urban areas is a key factor for the spread of canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to report the first autochthonous case of CVL in the municipality of Iguatama, in west central region of Minas Gerais State. Dog infection by Leishmania infantum chagasi was confirmed in the municipality, previously considered as non-endemic area to CVL. The canine infection by Leishmania was confirmed by three immunological tests for antibodies: indirect immunofluorescence assay (IFA), rapid Dual Path Platform (DPP®) CVL immunochromatographic test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and microscopic demonstration of Leishmania amastigotes in imprints of spleen and bone marrow stained by Giemsa. The species Leishmania infantum chagasi was confirmed by molecular diagnosis (PCR). Studies are being carried out, aiming to describe the importance and the prevalence of this disease in the region and factors associated with its transmission.(AU)
Leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é uma zoonose endêmica em algumas regiões do Brasil. Este parasito necessita de reservatórios para a manutenção da infecção e a presença de cães em áreas urbanas é um fator importante para a manutenção e expansão da leishmaniose visceral canina (LVC). O objetivo deste estudo foi relatar o primeiro caso autóctone de LVC no município de Iguatama, na região Centro Oeste de Minas Gerais, cidade onde a LVC era tida como não existente. A infecção canina por Leishmania foi confirmada por três testes imunológicos para pesquisa de anticorpos: reação de imunofluorescência indireta (RIFI), teste rápido de imunocromatografia com plataforma dupla (DPP® LVC) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e demonstração microscópica de amastigotas de Leishmania a partir de aposições de amostras de baço e de medula óssea corados pelo Giemsa. A espécie Leishmania infantum chagasi foi confirmada por diagnóstico molecular (PCR). Estudos estão sendo realizados com o objetivo de descrever a importância e a prevalência desta parasitose na região e os fatores associados com a transmissão.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Leishmania infantum/isolamento & purificação , Transmissão de Doença Infecciosa/veterinária , Leishmaniose Visceral/veterinária , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Cromatografia de Afinidade/veterinária , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaRESUMO
Abstract This study was about a semi-quantitative analysis of T lymphocytes (CD4+ and CD8+, FoxP3+ regulatory T cells), and macrophages in the gut wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Thirteen dogs were divided into three groups: group 1 (G1, n=5), dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) and infected with L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=5), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). There was no significant difference (p ≥ 0.05) on CD4+ and Treg cell numbers among the groups, whereas the levels of CD8+ T cells and macrophages were significantly higher in dogs from G1 group than in G2 and G3 (p ≤ 0.05), especially in intestinal segments with high parasite burden. Parasite burden correlated positively with levels of CD8+ T cells and macrophages (p ≤ 0.05), but was inversely correlated to levels of CD4+ T lymphocytes and FoxP3+ Treg cells. In conclusion, in the intestine of dogs with CVL, the increase of CD8+ T cells and macrophages population associated with high parasite burdens, but no changes of CD4+ T cells and FoxP3+ Treg cells suggest a possible immunoregulation by the parasite not dependent on Treg cells.
Resumo Este estudo foi uma análise semi-quantitativa de linfócitos T (CD4+, CD8+ e regulatórios - Treg FoxP3+) e macrófagos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. Treze cães foram divididos em três grupos: grupo 1 (G1, n=5) continha cães com leishmaniose visceral canina (LVC) e com amastigotas intestinais; grupo 2 (G2, n=5) continha cães com LVC, mas sem amastigotas intestinais e o grupo 3 (G3, n=3) continha cães não infectados (grupo controle). Verificou-se que não houve diferença significativa (p ≤ 0.05) no número de células CD4+ e de Treg entre os grupos, mas o número de células T CD8+ e macrófagos foi significativamente superior nos cães do grupo G1 em relação ao G2 e ao G3 (p ≤ 0,05), especialmente nos segmentos intestinais com altas cargas parasitárias. As altas cargas parasitarias correlacionaram positivamente com os números de CD8+ e macrófagos (p ≤ 0,05), mas negativamente com as células CD4+ e Treg. Em conclusão, no intestino dos cães com LVC, o aumento das populações de células T CD8+ e de macrófagos associado a altas cargas parasitárias, mas nenhuma alteração de células T CD4+ e células Treg FoxP3+ sugerem uma possível imunorregulação pelo parasita não dependente de células Treg.
Assuntos
Animais , Cães , Linfócitos T CD4-Positivos/citologia , Linfócitos T Reguladores/citologia , Leishmania infantum/imunologia , Linfócitos T CD8-Positivos/citologia , Doenças do Cão/imunologia , Leishmaniose Visceral/veterinária , Macrófagos/citologia , Contagem de Linfócitos/veterinária , Leishmaniose Visceral/imunologiaRESUMO
O presente estudo avaliou o estresse oxidativo e a adesão de leucócitos (AL) em cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Foram utilizados cães saudáveis (CN = 10) e cães acometidos por leishmaniose visceral na forma sintomática (CS = 10), submetidos previamente a exames de imunofluorescência indireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e pesquisa do parasito em aspirados de medula óssea. Soro foi utilizado para avaliação de malondialdeído (MDA) no ensaio para espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e AL foi determinada pelo método da coluna de nylon em sangue em EDTA, heparina e citrato. Os dados de AL foram expressos em porcentagem e MDA em média ± desvio padrão, submetidos ao teste T de student não pareado (p 0,05). Amostras em heparina apresentaram níveis mais elevados de AL no grupo CS (55,62%, p 0,05) quando comparadas com EDTA e citrato (10,46% e 5,28%). Citrato e EDTA inibiram AL em cães doentes e saudáveis, enquanto a heparina preservou a AL. A proporção neutrofílica se apresentou reduzida nas amostras em heparina (85% para 67%, p 0,05) quando comparadas com citrato e EDTA, que por sua vez mantiveram-se estáveis (83% para 80%). Os níveis de MDA apresentaram-se mais elevados em CS (0,0117µM ± 0,002) quando comparado com CN (0,0057µM ± 0,001) (p 0,05). Estes dados dão suporte à conclusão de que na LVC ocorre elevação do estress