Desenvolvimento e validação de plataformas do tipo "Point-of-Care" para o diagnóstico molecular de arbovírus emergentes
Thesis
em Pt
| ARCA
| ID: arc-60550
RESUMO
As arboviroses, como as provocadas pelo o vírus Zika (ZIKV) e o vírus chikungunya (CHIKV), têm sido associadas a surtos em larga escala e epidemias em vários países de clima tropical e subtropical nos últimos anos. Atualmente, o diagnóstico dos pacientes infectados por estes vírus é realizado em laboratórios centralizados utilizando a reação de transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR), que, embora seja o método molecular padrão-ouro para o diagnóstico molecular, tem várias desvantagens para uso em áreas remotas e de poucos recursos, como alto custo e necessidade de equipamentos especializados. Essas desvantagens dificultam a aplicação e utilização para um grande número de amostras. As plataformas de diagnóstico point-of-care (POC) têm o potencial de superar essas limitações, especialmente em países em desenvolvimento. Com isso em mente, nós desenvolvemos e validamos duas plataformas de diagnóstico baseadas em RT-LAMP e biossensores moleculares para a detecção rápida do ZIKV e CHIKV em amostras de pacientes e amostras de mosquitos. O RT-LAMP foi capaz de detectar o ZIKV em diversos tipos de amostras (soro, urina, saliva e sêmen) em apenas 20 minutos, sem extração de RNA. O ensaio RT-LAMP foi altamente específico e até 100 vezes mais sensível do que RT-qPCR. Em seguida, validamos o ensaio com 100 amostras de soro de pacientes coletadas de casos suspeitos de infecção por arbovírus no estado de Pernambuco, epicentro da última epidemia de Zika. Comparado com a RT-qPCR, o ensaio RT-LAMP forneceu sensibilidade de 100%, especificidade de 93,75% e uma precisão geral de 95,00%. Por outro lado, os biossensores moleculares apresentaram sensibilidade similar e alta especificidade quando comparado a RTqPCR. Na sequência, validamos os biossensores com 268 amostras clínicas e as análises demonstraram sensibilidade de 94,52%, especificidade de 100% e uma precisão geral de 98,51%. Demonstrando a programabilidade e extensibilidade de ambas as plataformas de diagnóstico, alcançamos um desempenho de diagnóstico semelhante para a detecção do CHIKV em soro, saliva, urina e amostras de mosquitos. Por fim, também foi otimizado um método alternativo de extração do RNA baseado em fervura acoplado a técnica de RT-qPCR para a detecção molecular do ZIKV. Tomados em conjunto, o ensaio RT-LAMP e os biossensores moleculares fornecem duas alternativas promissoras e de baixo custo para o diagnóstico rápido do ZIKV e CHIKV e possuem o potencial de aumentar a capacidade diagnóstica em áreas afetadas por estes arbovírus emergentes, particularmente em países com baixa infraestrutura laboratorial.
Palavras-chave
Zika virus; Chikungunya; Infecção pelo Zika virus; Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa; Técnicas Biossensoriais; Culicidae; Custos e Análise de Custo; Estudos de Avaliação; Sensibilidade e Especificidade; Insetos Vetores; Técnicas e Procedimentos Diagnósticos; Zika virus; Chikungunya; Zika virus infection; Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction; Biosensory Techniques; Culicidae; Costs and Cost Analysis; Assessment Studies; Sensitivity and Specificity; Insects Vectors; Diagnostic Techniques and Procedures; virus zika; Chikungunya; Infección por el virus del Zika; Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa; Técnicas Biosensoriales; Culicidae; Costos y análisis de costos; Estudios de evaluación; Sensibilidad y especificidad; Vectores de insectos; Técnicas y procedimientos de diagnóstico; Virus Zika; Chikungunya; Infection par le virus Zika; Réaction en chaîne par polymérase transcriptase inverse; Techniques biosensorielles; Culicidés; Coûts et analyse des coûts; Études d'évaluation; Sensibilité et spécificité; Vecteurs d'insectes; Techniques et procédures de diagnostic
Texto completo:
1
Coleções:
06-national
Base de dados:
ARCA
Assunto principal:
Técnicas Biossensoriais
/
Sensibilidade e Especificidade
/
Técnicas e Procedimentos Diagnósticos
/
Custos e Análise de Custo
/
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
/
Estudo de Avaliação
/
Zika virus
/
Infecção por Zika virus
/
Insetos Vetores
/
Culicidae
Idioma:
Pt
Ano de publicação:
2021
Tipo de documento:
Thesis