Caracterização da imunogenicidade das proteínas recombinantes Virb9, Virb10 e fator termo instável de Elongação de Peptídeos de Anaplasma marginale em camundongos / Characterization of the immunogenicity of recombinant proteins VirB9, VirB10 and Elongation Factor Tu of Anaplasma marginale in mice

RESUMO

Considerando as limitações dos atuais métodos de controle contra a anaplasmose bovina, o desenvolvimento de uma vacina efetiva se faz necessário. A partir do advento da análise genômica e proteômica, novas proteínas de membrana de Anaplasma marginale foram identificadas como possíveis candidatas a componentes de uma vacina, tais como, VirB9, VirB10 e Fator Termo Instavél de Elongação de Peptídeos (EF-Tu). Embora estas proteínas ainda não estejam bem caracterizadas na membrana de A. marginale, a produção destas na forma recombinante (rVirB 9, rVirB10 e rEF-Tu) tem sido realizada, mas as mesmas ainda não foram exploradas em formulações vacinais. Neste trabalho, avaliou-se o uso de rVirB9, rVirB10 e rEF-Tu emulsionadas em adjuvante Montanide em camundongos. Nas condições testadas, verificou-se a indução de forte resposta imune humoral com a produção de IgG1 e IgG2a, sendo que as proporções dos níveis de produção destas subclasses indicam predomínio de IgG1. Entretanto, esplenócitos de animais, que foram injetados com rVirB9 ou rVirB10, produziram interferon-gama acima do limite de detecção do ensaio após estimulação in vitro, sinalizando assim resposta celular específica. Assim, novas avaliações serão realizadas com a finalidade de modular o perfil de resposta imune obtido em bovinos e avaliar a proteção contra A. marginale.

ABSTRACT

Considering the limitations of current methods of anaplasmosis control, the development of a more effective vaccine is required. Previous studies, using proteomic and genomic approaches, have identified new membrane proteins in Anaplasma marginale that may be vaccine candidates. These include VirB9, VirB10 and elongation factor-Tu (EFTu). Although the role of these proteins in the membrane of A. marginale has not been properly characterized, production of the recombinant proteins rVirB9, rVirB10, and rEF-Tu has been achieved. However, these recombinant proteins have not yet been exploited in vaccine formulations. The present study describes the use of rVirB9, rVirB10 and rEF-Tu, emulsificated in adjuvant Montanide, in mice. A strong humoral immune response was induced under these conditions, with both IgG1 and IgG2a production. The IgG2a/IgG1 ratios revealed a predominance of IgG1. However, splenocytes of the animals that received rVirB9 or rVirB10 produced high levels of gamma interferon after in vitro stimulation, indicating a specific cellular immune response to these proteins. Therefore, further studies are required to adjust the profile of the immune response in order to perform tests of protection against A. marginale in cattle.