Massively parallel single-nucleotide mutagenesis using reversibly terminated inosine.
Nat Methods
; 13(11): 923-924, 2016 Nov.
Article
em En
| MEDLINE
| ID: mdl-27694911
ABSTRACT
Large-scale mutagenesis of target DNA sequences allows researchers to comprehensively assess the effects of single-nucleotide changes. Here we demonstrate the construction of a systematic allelic series (SAS) using massively parallel single-nucleotide mutagenesis with reversibly terminated deoxyinosine triphosphates (rtITP). We created a mutational library containing every possible single-nucleotide mutation surrounding the active site of the TEM-1 ß-lactamase gene. When combined with high-throughput functional assays, SAS mutational libraries can expedite the functional assessment of genetic variation.
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1
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01-internacional
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MEDLINE
Assunto principal:
Beta-Lactamases
/
Análise Mutacional de DNA
/
Mutagênese Sítio-Dirigida
/
Polimorfismo de Nucleotídeo Único
/
Sequenciamento de Nucleotídeos em Larga Escala
/
Inosina Trifosfato
Idioma:
En
Revista:
Nat Methods
Assunto da revista:
TECNICAS E PROCEDIMENTOS DE LABORATORIO
Ano de publicação:
2016
Tipo de documento:
Article
País de afiliação:
Estados Unidos