A modification of QuEChERS method to analyse anticoagulant rodenticides using small blood samples

RESUMEN

El uso de rodenticidas anticoagulantes es el método más frecuentemente utilizado para el control de plagas de roedores. Debido a sus características físico-químicas y particular mecanismo de acción, la utilización de estos compuestos en zonas rurales puede suponer un riesgo de intoxicación secundaria de sus depredadores. Para evaluar el riesgo a estos compuestos para la fauna silvestre, especialmente en aves rapaces que se alimentan de roedores, se llevan a cabo los programas de biomonitorización. Se ha desarrollado un método rápido, fácil y económico que permita el análisis de pequeños volúmenes de muestra de sangre. En el presente trabajo se han comparado tres diferentes modificaciones de la metodología "QuEChERS", y posteriormente uno de ellos fue elegido para la detección y cuantificación de estos compuestos. El proceso previo al análisis de los extractos incluye dos pasos sencillos: La muestra es extraída usando un solvente orgánico y una solución salina y, posteriormente, el sobrenadante es purificado usando una técnica de extracción en fase solida dispersiva. La detección y cuantificación de los rodenticidas anticoagulantes se realizó por cromatografía líquida acoplada a un detector de masas Agilent 1100 VL con trampa de iones y fuente de electrospray para ionización. La técnica finalmente elegida permite una recuperación entre 72-134% para los siete rodenticidas objeto de estudio (warfarina, cumatetralilo, difenacoum, clorofacinona, brodifacoum, bromadiolona, difacinona), la cual es superior a la obtenida con otras técnicas que analizan compuestos similares. Además, la sensibilidad de esta técnica es mayor a la que ofrecen otras técnicas. Con el fin de comprobar la utilidad de la técnica validada, se analizaron un total de 50 muestras de sangre de búho real (Bubo bubo) capturados en su hábitat natural (AU)

ABSTRACT

The use of anticoagulant rodenticides is the most common method to control rodent plagues. Due to their physicochemical characteristics and particular mechanism of action, the application of these compounds in rural areas can pose a risk of secondary poisoning for their predators. In order to evaluate the risk of these compounds for wildlife, especially raptors that feed on rodents, biomonitoring programmes are undertaken. A fast, easy and low cost technique was needed to analyse small volumes of blood samples. Therefore, three different modifications of QuEChERS methodology have been compared, and one of them selected to detect and quantify these compounds. The process prior to analysis of the extracts involves two simple steps: the sample is extracted and partitioned using an organic solvent and salt solution. The supernatant is then cleaned using a dispersive solid phase extraction (dSPE) technique. Detection and quantification of the anticoagulant rodenticides were performed by LC-MSMS on an Agilent 1100 VL Series ESI/LC/MSD, with an electrospray ionisation (ESI) source and ion trap analyser. The method finally chosen provides a 72-134% recoveries for the seven rodenticides (warfarin, coumatetralyl, brodifacoum, bromadiolone, difenacoum, chlorophacinone, diphacinone), higher than in other methods to analyse similar compounds. Sensitivity of our method is also higher than in other methods. In order to prove the utility of the technique, a total of 50 blood samples of free-living Eagle owls (Bubo bubo) were analysed (AU)