Evidence for interferon production and its correlation with YF 17DD vaccine virus yields in primary chick embryo cells.

Early experiments have resulted in the establishment of an efficient methodology for the production of a yellow fever vaccine in chicken embryo fibroblasts (CEF) using the 17DD virus strain [Freire, M.S., Mann, G.F., Marchevsky, R.S., Yamamura, A.M., Almeida, L.F., Jabor, A.V., Malachias, J.M., Coutinho, E.S., Galler, R., 2005. Production of yellow fever 17DD vaccine virus in primary culture of chicken embryo fibroblasts: yields, thermo and genetic stability, attenuation and immunogenicity. Vaccine 23, 2501-2512]. To investigate the role of the interferon system in vaccine virus yields, CEF cultures seeded at high and low cell densities and infected with the yellow fever 17DD virus were used. The supernatants of these cultures were tested for the presence of interferon by an assay based on the reduction of cytopathic effect of a challenge virus (Sindbis), for the enzymatic activity of the interferon-induced 2',5'-oligoadenylate synthetase and for the expression of 2',5'-oligoadenylate synthetase mRNA. The presence of interferon and its influence in the replication of yellow fever 17DD virus in CEF cultures was clearly demonstrated.

Biological characterization of clones derived from the Edmonstron strain of meales virus in comparison with Schwarz and CAM-70 vaccine strains

Four virus clones were derived from the Edmonston strain of measles virus by repeated plaque purification. These clones were compared with the vaccine strains Schwarz and CAM-70 in terms of biological activities including plaque formation, hemolysis and replication in Vero cells and chick embryo fibroblasts (CEF). Two clones of intermediate plaque yielded mixed plaque populations on subcultivation whereas the other two, showing small and large plaque sizes, showed stable plaque phenotypes. The vaccine strains showed consistent homogeneous plaque populations. All the Edmonston clones showed agglutinaton of monkey erythrocytes in isotonic solution while both vaccine strains hemagglutinated only in the presence of high salt concentrations. Variation in the hemolytic activity was observed among the four clones but no hemolytic activity was detected for the vaccine virus strains. Vaccine strains replicated efficiently both in Vero cells and CEF. All four clones showed efficient replication in Vero cells but different replication profiles in CEF. Two of them replicated efficiently, one was of intermediate efficiency and the other showed no replication in CEF. Two of the clones showed characteristics similar to vaccine strains. One in terms of size and homogeneity of plaques, the other for a low hemolytic activity and both for the efficiency of propagation in CEF.

Caracterização genômica e biológica do vírus do sarampo cepa vacinal CAM-70 / Genomic and biological characterization of the measles virus cepa vaccine CAM-70

Bio-Manguinhos possui a capacidade instalada de produção da vacina contra o sarampo utilizando a cepa viral Biken CAM-70. No momento, esta vacina não está sendo produzida devido à utilização, pelo Ministério da Saúde, da vacina tríplice viral (sarampo, caxumba e rubéola) nas campanhas de vacinação. Entretanto, o potencial de atender a mercados externos com uma vacina monovalente contra o sarampo, faz com que, a qualquer momento, a produção seja retomada. Neste contexto, a caracterização genômica e biológica deste vírus vacinal pode contribuir para a introdução de melhorias no processo de produção e nos fornecer dados para um maior conhecimento do nosso produto. Para avaliar a estabilidade genética da cepa CAM-70 foram realizadas dez passagens do vírus semente FMS-7 em culturas primárias de embrião de galinha (chicken embryo fibroblast- CEF). Os genomas do vírus semente FMS-7, do vírus proveniente do frasco de vacina (correspondente à terceira passagem - VSF-3) e da décima passagem (VSF-10) foram seqüenciados e comparados entre si e com as seqüências disponíveis de vacinas de sarampo. O resultado do seqüenciamento nucleotídico direto de FMS-7, VSF-3 e VSF-10 revelou seqüências genômicas idênticas, demonstrando uma grande estabilidade genética deste vírus nas condições de cultivo empregadas. Neste trabalho investigamos também a influência do interferon (IFN) no rendimento viral. Culturas de CEF em alta densidade (AD) e baixa densidade (BD) celular foram inoculadas com CAM-70 e coletadas diariamente por um período de até 15 dias. As suspensões provenientes destas culturas foram tituladas em um teste para detecção de IFN e avaliados quanto à expressão da enzima 2-5 oligoadenilato sintetase (2-5OAS). O vírus CAM-70 foi capaz de induzir a produção de IFN em CEF, como foi demonstrado através dos ensaios de titulação e pela expressão gênica de 2-5 OAS. A obtenção de títulos virais mais elevados em BD sugere que este vírus seja sensível ao IFN...